Difference between revisions of "Team:USTC/Notebook/8 24"

 
Line 154: Line 154:
 
         <div class="menu">
 
         <div class="menu">
 
           <a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team"> Members  </a>
 
           <a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team"> Members  </a>
−
<a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team/Sponsor"> Sponsor  </a>
+
          <a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team/Sponsor"> Sponsor  </a>
−
<a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team/AboutUSTC"> About USTC  </a>
+
          <a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team/AboutUSTC"> About USTC  </a>
−
<a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team/Acknowledgements"> Acknowledgements  </a>
+
          <a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team/Acknowledgements"> Acknowledgements  </a>
−
<a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team/Gallery"> Gallery  </a>
+
          <a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team/Gallery"> Gallery  </a>
−
<a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Collaborations"> Collaborations </a>
+
          <a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Collaborations"> Collaborations </a>
 
         </div>
 
         </div>
 
       </div>
 
       </div>
Line 219: Line 219:
 
               <div class="menu">
 
               <div class="menu">
 
                 <a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team"> Members  </a>
 
                 <a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team"> Members  </a>
−
<a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team/Sponsor"> Sponsor  </a>
+
                <a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team/Sponsor"> Sponsor  </a>
−
<a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team/AboutUSTC"> About USTC  </a>
+
                <a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team/AboutUSTC"> About USTC  </a>
−
<a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team/Acknowledgements"> Acknowledgements  </a>
+
                <a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team/Acknowledgements"> Acknowledgements  </a>
−
<a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team/Gallery"> Gallery  </a>
+
                <a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Team/Gallery"> Gallery  </a>
−
<a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Collaborations"> Collaborations </a>
+
                <a class="item" href="https://2016.igem.org/Team:USTC/Collaborations"> Collaborations </a>
 
               </div>
 
               </div>
 
             </div>
 
             </div>
Line 260: Line 260:
 
            
 
            
 
            
 
            
−
<p><strong>DATE：8.24</strong></p>
+
          <p><strong>DATE：8.24</strong></p>
−
<p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
+
          <p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
−
<strong>Plasmid Extraction for sfGFP11</strong></p>
+
          <strong>Plasmid Extraction for sfGFP11</strong></p>
−
<p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
+
          <p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
−
<strong>PCR of sup35</strong></p>
+
          <strong>PCR of sup35</strong></p>
−
<p>Procedure:</p>
+
          <p>Procedure:</p>
−
<p>1.Prepare 8 PCR tubes and sequentially add：</p>
+
          <p>1.Prepare 8 PCR tubes and sequentially add：</p>
−
<table class="ui celled small table">
+
          <table class="ui celled small table">
−
<thead>
+
            <thead>
−
<tr>
+
              <tr>
−
  <th>sample</th>
+
                <th>sample</th>
−
  <th>1,2,3,4,5,6,7,8</th>
+
                <th>1,2,3,4,5,6,7,8</th>
−
</tr>
+
              </tr>
−
</thead>
+
            </thead>
−
<tbody>
+
            <tbody>
−
<tr>
+
              <tr>
−
  <td>Sterilized ddH<sub>2</sub>O</td>
+
                <td>Sterilized ddH<sub>2</sub>O</td>
−
  <td>9 μL</td>
+
                <td>9 μL</td>
−
</tr>
+
              </tr>
−
<tr>
+
              <tr>
−
  <td>2×HiFi-PCR Master</td>
+
                <td>2×HiFi-PCR Master</td>
−
  <td>12.5 μL</td>
+
                <td>12.5 μL</td>
−
</tr>
+
              </tr>
−
<tr>
+
              <tr>
−
  <td>Template</td>
+
                <td>Template</td>
−
  <td>1.5 μL</td>
+
                <td>1.5 μL</td>
−
</tr>
+
              </tr>
−
<tr>
+
              <tr>
−
  <td>Primer 1</td>
+
                <td>Primer 1</td>
−
  <td>1 μL</td>
+
                <td>1 μL</td>
−
</tr>
+
              </tr>
−
<tr>
+
              <tr>
−
  <td>Primer 2</td>
+
                <td>Primer 2</td>
−
  <td>1 μL</td>
+
                <td>1 μL</td>
−
</tr>
+
              </tr>
−
<tr>
+
              <tr>
−
  <td>total</td>
+
                <td>total</td>
−
  <td>25 μL</td>
+
                <td>25 μL</td>
−
</tr>
+
              </tr>
−
</tbody>
+
            </tbody>
−
<table class="ui celled small table">
+
            <table class="ui celled small table">
−
<p>2.PCR reaction
+
              <p>2.PCR reaction
−
Parameters setting：</p>
+
              Parameters setting：</p>
−
<table class="ui celled small table">
+
              <table class="ui celled small table">
−
<thead>
+
                <thead>
−
<tr>
+
                  <tr>
−
  <th>stage</th>
+
                    <th>stage</th>
−
  <th>temperature</th>
+
                    <th>temperature</th>
−
  <th>time</th>
+
                    <th>time</th>
−
</tr>
+
                  </tr>
−
</thead>
+
                </thead>
−
<tbody>
+
                <tbody>
−
<tr>
+
                  <tr>
−
  <td>Pre-Duration</td>
+
                    <td>Pre-Duration</td>
−
  <td>95℃</td>
+
                    <td>95℃</td>
−
  <td>10 min</td>
+
                    <td>10 min</td>
−
</tr>
+
                  </tr>
−
<tr>
+
                  <tr>
−
  <td>Duration</td>
+
                    <td>Duration</td>
−
  <td>95℃</td>
+
                    <td>95℃</td>
−
  <td>1 min</td>
+
                    <td>1 min</td>
−
</tr>
+
                  </tr>
−
<tr>
+
                  <tr>
−
  <td>Anneal</td>
+
                    <td>Anneal</td>
−
  <td>58℃</td>
+
                    <td>58℃</td>
−
  <td>1 min</td>
+
                    <td>1 min</td>
−
</tr>
+
                  </tr>
−
<tr>
+
                  <tr>
−
  <td>Extend</td>
+
                    <td>Extend</td>
−
  <td>72℃</td>
+
                    <td>72℃</td>
−
  <td>1 min 50 s</td>
+
                    <td>1 min 50 s</td>
−
</tr>
+
                  </tr>
−
<tr>
+
                  <tr>
−
  <td>Post-Extend</td>
+
                    <td>Post-Extend</td>
−
  <td>72℃</td>
+
                    <td>72℃</td>
−
  <td>10 min</td>
+
                    <td>10 min</td>
−
</tr>
+
                  </tr>
−
<tr>
+
                  <tr>
−
  <td>Final</td>
+
                    <td>Final</td>
−
  <td>4℃</td>
+
                    <td>4℃</td>
−
  <td>--</td>
+
                    <td>--</td>
−
</tr>
+
                  </tr>
−
</tbody>
+
                </tbody>
−
<table class="ui celled small table">
+
                <table class="ui celled small table">
−
<p>30 cycles(Duration ~ Extend)</p>
+
                  <p>30 cycles(Duration ~ Extend)</p>
−
<p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
+
                  <p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
−
<strong>Double digestion of sup35</strong></p>
+
                  <strong>Double digestion of sup35</strong></p>
−
<p><strong>Recorder：Yu Xie</strong>
+
                  <p><strong>Recorder：Yu Xie</strong>
−
<strong>Ligation of sup35 and pUC57-sfGFP11</strong></p>
+
                  <strong>Ligation of sup35 and pUC57-sfGFP11</strong></p>
−
<p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
+
                  <p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
−
<strong>Transformation of combinant plasmid pUC57 containing sup35-sfGFP11</strong></p>
+
                  <strong>Transformation of combinant plasmid pUC57 containing sup35-sfGFP11</strong></p>
−
<p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
+
                  <p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
−
<strong>PCR of sup35</strong></p>
+
                  <strong>PCR of sup35</strong></p>
−
<p>Procedure:</p>
+
                  <p>Procedure:</p>
−
<p>1.Prepare 8 PCR tubes and sequentially add：</p>
+
                  <p>1.Prepare 8 PCR tubes and sequentially add：</p>
−
<table class="ui celled small table">
+
                  <table class="ui celled small table">
−
<thead>
+
                    <thead>
−
<tr>
+
                      <tr>
−
  <th>sample</th>
+
                        <th>sample</th>
−
  <th>1,2,3,4,5,6,7,8</th>
+
                        <th>1,2,3,4,5,6,7,8</th>
−
</tr>
+
                      </tr>
−
</thead>
+
                    </thead>
−
<tbody>
+
                    <tbody>
−
<tr>
+
                      <tr>
−
  <td>Sterilized ddH<sub>2</sub>O</td>
+
                        <td>Sterilized ddH<sub>2</sub>O</td>
−
  <td>9 μL</td>
+
                        <td>9 μL</td>
−
</tr>
+
                      </tr>
−
<tr>
+
                      <tr>
−
  <td>2×HiFi-PCR Master</td>
+
                        <td>2×HiFi-PCR Master</td>
−
  <td>12.5 μL</td>
+
                        <td>12.5 μL</td>
−
</tr>
+
                      </tr>
−
<tr>
+
                      <tr>
−
  <td>Template</td>
+
                        <td>Template</td>
−
  <td>1.5 μL</td>
+
                        <td>1.5 μL</td>
−
</tr>
+
                      </tr>
−
<tr>
+
                      <tr>
−
  <td>Primer 1</td>
+
                        <td>Primer 1</td>
−
  <td>1 μL</td>
+
                        <td>1 μL</td>
−
</tr>
+
                      </tr>
−
<tr>
+
                      <tr>
−
  <td>Primer 2</td>
+
                        <td>Primer 2</td>
−
  <td>1 μL</td>
+
                        <td>1 μL</td>
−
</tr>
+
                      </tr>
−
<tr>
+
                      <tr>
−
  <td>total</td>
+
                        <td>total</td>
−
  <td>25 μL</td>
+
                        <td>25 μL</td>
−
</tr>
+
                      </tr>
−
</tbody>
+
                    </tbody>
−
<table class="ui celled small table">
+
                    <table class="ui celled small table">
−
<p>2.PCR reaction
+
                      <p>2.PCR reaction
−
Parameters setting：</p>
+
                      Parameters setting：</p>
−
<table class="ui celled small table">
+
                      <table class="ui celled small table">
−
<thead>
+
                        <thead>
−
<tr>
+
                          <tr>
−
  <th>stage</th>
+
                            <th>stage</th>
−
  <th>temperature</th>
+
                            <th>temperature</th>
−
  <th>time</th>
+
                            <th>time</th>
−
</tr>
+
                          </tr>
−
</thead>
+
                        </thead>
−
<tbody>
+
                        <tbody>
−
<tr>
+
                          <tr>
−
  <td>Pre-Duration</td>
+
                            <td>Pre-Duration</td>
−
  <td>95℃</td>
+
                            <td>95℃</td>
−
  <td>10 min</td>
+
                            <td>10 min</td>
−
</tr>
+
                          </tr>
−
<tr>
+
                          <tr>
−
  <td>Duration</td>
+
                            <td>Duration</td>
−
  <td>95℃</td>
+
                            <td>95℃</td>
−
  <td>1 min</td>
+
                            <td>1 min</td>
−
</tr>
+
                          </tr>
−
<tr>
+
                          <tr>
−
  <td>Anneal</td>
+
                            <td>Anneal</td>
−
  <td>58℃</td>
+
                            <td>58℃</td>
−
  <td>1 min</td>
+
                            <td>1 min</td>
−
</tr>
+
                          </tr>
−
<tr>
+
                          <tr>
−
  <td>Extend</td>
+
                            <td>Extend</td>
−
  <td>72℃</td>
+
                            <td>72℃</td>
−
  <td>1 min 50s</td>
+
                            <td>1 min 50s</td>
−
</tr>
+
                          </tr>
−
<tr>
+
                          <tr>
−
  <td>Post-Extend</td>
+
                            <td>Post-Extend</td>
−
  <td>72℃</td>
+
                            <td>72℃</td>
−
  <td>10 min</td>
+
                            <td>10 min</td>
−
</tr>
+
                          </tr>
−
<tr>
+
                          <tr>
−
  <td>Final</td>
+
                            <td>Final</td>
−
  <td>4℃</td>
+
                            <td>4℃</td>
−
  <td>--</td>
+
                            <td>--</td>
−
</tr>
+
                          </tr>
−
</tbody>
+
                        </tbody>
−
<table class="ui celled small table">
+
                        <table class="ui celled small table">
−
<p>30 cycles(Duration ~ Extend)</p>
+
                          <p>30 cycles(Duration ~ Extend)</p>
−
<p><strong>Recorder：Yu Xie</strong>
+
                          <p><strong>Recorder：Yu Xie</strong>
−
<strong>Colony picking of sfGFP11</strong></p>
+
                          <strong>Colony picking of sfGFP11</strong></p>
−
<p><strong>Recorder: Chenyang Li</strong>
+
                          <p><strong>Recorder: Chenyang Li</strong>
−
<strong>PCR of pYeWGAP-BD</strong></p>
+
                          <strong>PCR of pYeWGAP-BD</strong></p>
−
<p><strong>Procedure:</strong></p>
+
                          <p><strong>Procedure:</strong></p>
−
<p>3.Prepare 4 PCR of pYeWGAP-BD tubes and sequentially add：
+
                          <p>3.Prepare 4 PCR of pYeWGAP-BD tubes and sequentially add：
−
4 μL Sterilized ddH<sub>2</sub>O,
+
                            4 μL Sterilized ddH<sub>2</sub>O,
−
6.5 μL 2XHiFi Pfu,
+
                            6.5 μL 2XHiFi Pfu,
−
0.5 μL primer F,
+
                            0.5 μL primer F,
−
0.5 μL primer R,
+
                            0.5 μL primer R,
−
1 μL DNA template.</p>
+
                          1 μL DNA template.</p>
−
<p>4.PCR reaction
+
                          <p>4.PCR reaction
−
Parameters setting：</p>
+
                          Parameters setting：</p>
−
<table class="ui celled small table">
+
                          <table class="ui celled small table">
−
<thead>
+
                            <thead>
−
<tr>
+
                              <tr>
−
  <th>stage</th>
+
                                <th>stage</th>
−
  <th>temperature</th>
+
                                <th>temperature</th>
−
  <th>time</th>
+
                                <th>time</th>
−
</tr>
+
                              </tr>
−
</thead>
+
                            </thead>
−
<tbody>
+
                            <tbody>
−
<tr>
+
                              <tr>
−
  <td>step 1</td>
+
                                <td>step 1</td>
−
  <td>95℃</td>
+
                                <td>95℃</td>
−
  <td>10 min</td>
+
                                <td>10 min</td>
−
</tr>
+
                              </tr>
−
<tr>
+
                              <tr>
−
  <td>step 2</td>
+
                                <td>step 2</td>
−
  <td>95℃</td>
+
                                <td>95℃</td>
−
  <td>30 s</td>
+
                                <td>30 s</td>
−
</tr>
+
                              </tr>
−
<tr>
+
                              <tr>
−
  <td>step 3</td>
+
                                <td>step 3</td>
−
  <td>58℃</td>
+
                                <td>58℃</td>
−
  <td>45 s</td>
+
                                <td>45 s</td>
−
</tr>
+
                              </tr>
−
<tr>
+
                              <tr>
−
  <td>step 4</td>
+
                                <td>step 4</td>
−
  <td>72℃</td>
+
                                <td>72℃</td>
−
  <td>45 s</td>
+
                                <td>45 s</td>
−
</tr>
+
                              </tr>
−
<tr>
+
                              <tr>
−
  <td>step 5</td>
+
                                <td>step 5</td>
−
  <td>72℃</td>
+
                                <td>72℃</td>
−
  <td>10 min</td>
+
                                <td>10 min</td>
−
</tr>
+
                              </tr>
−
<tr>
+
                              <tr>
−
  <td>step 6</td>
+
                                <td>step 6</td>
−
  <td>4℃</td>
+
                                <td>4℃</td>
−
  <td>--</td>
+
                                <td>--</td>
−
</tr>
+
                              </tr>
−
</tbody>
+
                            </tbody>
−
<table class="ui celled small table">
+
                            <table class="ui celled small table">
−
<p>30 cycles(step 2 ~ step 4)</p>
+
                              <p>30 cycles(step 2 ~ step 4)</p>
−
<p>results:</p>
+
                              <p>results:</p>
−
<p><img src="https://static.igem.org/mediawiki/2016/thumb/4/45/T--USTC--NB_0823_1.jpeg/750px-T--USTC--NB_0823_1.jpeg" alt="a" />
+
                              <p><img src="https://static.igem.org/mediawiki/2016/thumb/4/45/T--USTC--NB_0823_1.jpeg/750px-T--USTC--NB_0823_1.jpeg" alt="a" />
−
(from left to right: Trans 2K plus 2(contain Gelred), 1, 2, 3, 4)
+
                                (from left to right: Trans 2K plus 2(contain Gelred), 1, 2, 3, 4)
−
</p>
+
                              </p>
−
<p><strong>Plasmid Extraction for ligased YeWGAP and BD</strong>
+
                              <p><strong>Plasmid Extraction for ligased YeWGAP and BD</strong>
−
<strong>Recorder: Chenyang Li</strong></p>
+
                              <strong>Recorder: Chenyang Li</strong></p>
−
<p><strong>results</strong></p>
+
                              <p><strong>results</strong></p>
−
<table class="ui celled small table">
+
                              <table class="ui celled small table">
−
<thead>
+
                                <thead>
−
<tr>
+
                                  <tr>
−
  <th>sample</th>
+
                                    <th>sample</th>
−
  <th>YBE8241001</th>
+
                                    <th>YBE8241001</th>
−
  <th>YBE8241002</th>
+
                                    <th>YBE8241002</th>
−
  <th>YBE8241003</th>
+
                                    <th>YBE8241003</th>
−
  <th>YBE8241004</th>
+
                                    <th>YBE8241004</th>
−
</tr>
+
                                  </tr>
−
</thead>
+
                                </thead>
−
<tbody>
+
                                <tbody>
−
<tr>
+
                                  <tr>
−
  <td>A260/A280</td>
+
                                    <td>A260/A280</td>
−
  <td>1.88</td>
+
                                    <td>1.88</td>
−
  <td>1.86</td>
+
                                    <td>1.86</td>
−
  <td>1.89</td>
+
                                    <td>1.89</td>
−
  <td>1.88</td>
+
                                    <td>1.88</td>
−
</tr>
+
                                  </tr>
−
<tr>
+
                                  <tr>
−
  <td>A260/A230</td>
+
                                    <td>A260/A230</td>
−
  <td>2.27</td>
+
                                    <td>2.27</td>
−
  <td>1.92</td>
+
                                    <td>1.92</td>
−
  <td>2.22</td>
+
                                    <td>2.22</td>
−
  <td>2.22</td>
+
                                    <td>2.22</td>
−
</tr>
+
                                  </tr>
−
<tr>
+
                                  <tr>
−
  <td>concentration(ng/μL)</td>
+
                                    <td>concentration(ng/μL)</td>
−
  <td>203.1</td>
+
                                    <td>203.1</td>
−
  <td>174.7</td>
+
                                    <td>174.7</td>
−
  <td>181.3</td>
+
                                    <td>181.3</td>
−
  <td>177.8</td>
+
                                    <td>177.8</td>
−
</tr>
+
                                  </tr>
−
</tbody>
+
                                </tbody>
−
<table class="ui celled small table">
+
                                <table class="ui celled small table">
−
<p><strong>DATE：8.24</strong>
+
                                  <p><strong>DATE：8.24</strong>
−
<strong>Recorder: Chenyang Li</strong>
+
                                    <strong>Recorder: Chenyang Li</strong>
−
<strong>PCR of pYeWGAP-BD</strong></p>
+
                                  <strong>PCR of pYeWGAP-BD</strong></p>
−
<p><strong>Procedure:</strong></p>
+
                                  <p><strong>Procedure:</strong></p>
−
<p>3.Prepare 4 PCR of pYeWGAP-BD tubes and sequentially add：
+
                                  <p>3.Prepare 4 PCR of pYeWGAP-BD tubes and sequentially add：
−
3 μL Sterilized ddH<sub>2</sub>O,
+
                                    3 μL Sterilized ddH<sub>2</sub>O,
−
5 μL 2XHiFi Pfu,
+
                                    5 μL 2XHiFi Pfu,
−
0.5 μL primer F,
+
                                    0.5 μL primer F,
−
0.5 μL primer R,
+
                                    0.5 μL primer R,
−
1 μL DNA template.</p>
+
                                  1 μL DNA template.</p>
−
<p>4.PCR reaction
+
                                  <p>4.PCR reaction
−
Parameters setting：</p>
+
                                  Parameters setting：</p>
−
<table class="ui celled small table">
+
                                  <table class="ui celled small table">
−
<thead>
+
                                    <thead>
−
<tr>
+
                                      <tr>
−
  <th>stage</th>
+
                                        <th>stage</th>
−
  <th>temperature</th>
+
                                        <th>temperature</th>
−
  <th>time</th>
+
                                        <th>time</th>
−
</tr>
+
                                      </tr>
−
</thead>
+
                                    </thead>
−
<tbody>
+
                                    <tbody>
−
<tr>
+
                                      <tr>
−
  <td>step 1</td>
+
                                        <td>step 1</td>
−
  <td>95℃</td>
+
                                        <td>95℃</td>
−
  <td>10 min</td>
+
                                        <td>10 min</td>
−
</tr>
+
                                      </tr>
−
<tr>
+
                                      <tr>
−
  <td>step 2</td>
+
                                        <td>step 2</td>
−
  <td>95℃</td>
+
                                        <td>95℃</td>
−
  <td>30 s</td>
+
                                        <td>30 s</td>
−
</tr>
+
                                      </tr>
−
<tr>
+
                                      <tr>
−
  <td>step 3</td>
+
                                        <td>step 3</td>
−
  <td>58℃</td>
+
                                        <td>58℃</td>
−
  <td>45 s</td>
+
                                        <td>45 s</td>
−
</tr>
+
                                      </tr>
−
<tr>
+
                                      <tr>
−
  <td>step 4</td>
+
                                        <td>step 4</td>
−
  <td>72℃</td>
+
                                        <td>72℃</td>
−
  <td>45 s</td>
+
                                        <td>45 s</td>
−
</tr>
+
                                      </tr>
−
<tr>
+
                                      <tr>
−
  <td>step 5</td>
+
                                        <td>step 5</td>
−
  <td>72℃</td>
+
                                        <td>72℃</td>
−
  <td>10 min</td>
+
                                        <td>10 min</td>
−
</tr>
+
                                      </tr>
−
<tr>
+
                                      <tr>
−
  <td>step 6</td>
+
                                        <td>step 6</td>
−
  <td>4℃</td>
+
                                        <td>4℃</td>
−
  <td>--</td>
+
                                        <td>--</td>
−
</tr>
+
                                      </tr>
−
</tbody>
+
                                    </tbody>
−
<table class="ui celled small table">
+
                                    <table class="ui celled small table">
−
<p>30 cycles(step 2 ~ step 4)</p>
+
                                      <p>30 cycles(step 2 ~ step 4)</p>
−
<p>results:</p>
+
                                      <p>results:</p>
−
<p><img src="https://static.igem.org/mediawiki/2016/thumb/5/54/T--USTC--NB_0820_2.jpeg/750px-T--USTC--NB_0820_2.jpeg" alt="a" />
+
                                      <p><img src="https://static.igem.org/mediawiki/2016/thumb/5/54/T--USTC--NB_0820_2.jpeg/750px-T--USTC--NB_0820_2.jpeg" alt="a" />
−
(from left to right: Trans 2K plus 2(contain Gelred),YBE8241001，1，YBE8241002，2，YBE8241003，3，YBE8241004，4，)
+
                                        (from left to right: Trans 2K plus 2(contain Gelred),YBE8241001，1，YBE8241002，2，YBE8241003，3，YBE8241004，4，)
−
</p>
+
                                      </p>
−
<p><strong>DATE:8.25</strong></p>
+
                                      <p><strong>DATE:8.25</strong></p>
−
<p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
+
                                      <p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
−
<strong>Plasmid Extraction for sfGFP11</strong></p>
+
                                      <strong>Plasmid Extraction for sfGFP11</strong></p>
−
<p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
+
                                      <p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
−
<strong>Transformation of combinant plasmid pUC57 containing sup35-sfGFP11</strong></p>
+
                                      <strong>Transformation of combinant plasmid pUC57 containing sup35-sfGFP11</strong></p>
−
<p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
+
                                      <p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
−
<strong>PCR of sup35</strong></p>
+
                                      <strong>PCR of sup35</strong></p>
−
<p>Procedure:</p>
+
                                      <p>Procedure:</p>
−
<p>1.Prepare 8 PCR tubes and sequentially add：</p>
+
                                      <p>1.Prepare 8 PCR tubes and sequentially add：</p>
−
<table class="ui celled small table">
+
                                      <table class="ui celled small table">
−
<thead>
+
                                        <thead>
−
<tr>
+
                                          <tr>
−
  <th>sample</th>
+
                                            <th>sample</th>
−
  <th>1,2,3,4,5,6,7,8</th>
+
                                            <th>1,2,3,4,5,6,7,8</th>
−
</tr>
+
                                          </tr>
−
</thead>
+
                                        </thead>
−
<tbody>
+
                                        <tbody>
−
<tr>
+
                                          <tr>
−
  <td>Sterilized ddH<sub>2</sub>O</td>
+
                                            <td>Sterilized ddH<sub>2</sub>O</td>
−
  <td>9 μL</td>
+
                                            <td>9 μL</td>
−
</tr>
+
                                          </tr>
−
<tr>
+
                                          <tr>
−
  <td>2×HiFi-PCR Master</td>
+
                                            <td>2×HiFi-PCR Master</td>
−
  <td>12.5 μL</td>
+
                                            <td>12.5 μL</td>
−
</tr>
+
                                          </tr>
−
<tr>
+
                                          <tr>
−
  <td>Template</td>
+
                                            <td>Template</td>
−
  <td>1.5 μL</td>
+
                                            <td>1.5 μL</td>
−
</tr>
+
                                          </tr>
−
<tr>
+
                                          <tr>
−
  <td>Primer 1</td>
+
                                            <td>Primer 1</td>
−
  <td>1 μL</td>
+
                                            <td>1 μL</td>
−
</tr>
+
                                          </tr>
−
<tr>
+
                                          <tr>
−
  <td>Primer 2</td>
+
                                            <td>Primer 2</td>
−
  <td>1 μL</td>
+
                                            <td>1 μL</td>
−
</tr>
+
                                          </tr>
−
<tr>
+
                                          <tr>
−
  <td>total</td>
+
                                            <td>total</td>
−
  <td>25 μL</td>
+
                                            <td>25 μL</td>
−
</tr>
+
                                          </tr>
−
</tbody>
+
                                        </tbody>
−
<table class="ui celled small table">
+
                                        <table class="ui celled small table">
−
<p>2.PCR reaction
+
                                          <p>2.PCR reaction
−
Parameters setting：</p>
+
                                          Parameters setting：</p>
−
<table class="ui celled small table">
+
                                          <table class="ui celled small table">
−
<thead>
+
                                            <thead>
−
<tr>
+
                                              <tr>
−
  <th>stage</th>
+
                                                <th>stage</th>
−
  <th>temperature</th>
+
                                                <th>temperature</th>
−
  <th>time</th>
+
                                                <th>time</th>
−
</tr>
+
                                              </tr>
−
</thead>
+
                                            </thead>
−
<tbody>
+
                                            <tbody>
−
<tr>
+
                                              <tr>
−
  <td>Pre-Duration</td>
+
                                                <td>Pre-Duration</td>
−
  <td>95℃</td>
+
                                                <td>95℃</td>
−
  <td>10 min</td>
+
                                                <td>10 min</td>
−
</tr>
+
                                              </tr>
−
<tr>
+
                                              <tr>
−
  <td>Duration</td>
+
                                                <td>Duration</td>
−
  <td>95℃</td>
+
                                                <td>95℃</td>
−
  <td>1 min</td>
+
                                                <td>1 min</td>
−
</tr>
+
                                              </tr>
−
<tr>
+
                                              <tr>
−
  <td>Anneal</td>
+
                                                <td>Anneal</td>
−
  <td>58℃</td>
+
                                                <td>58℃</td>
−
  <td>1 min</td>
+
                                                <td>1 min</td>
−
</tr>
+
                                              </tr>
−
<tr>
+
                                              <tr>
−
  <td>Extend</td>
+
                                                <td>Extend</td>
−
  <td>72℃</td>
+
                                                <td>72℃</td>
−
  <td>1 min 50 s</td>
+
                                                <td>1 min 50 s</td>
−
</tr>
+
                                              </tr>
−
<tr>
+
                                              <tr>
−
  <td>Post-Extend</td>
+
                                                <td>Post-Extend</td>
−
  <td>72℃</td>
+
                                                <td>72℃</td>
−
  <td>10 min</td>
+
                                                <td>10 min</td>
−
</tr>
+
                                              </tr>
−
<tr>
+
                                              <tr>
−
  <td>Final</td>
+
                                                <td>Final</td>
−
  <td>4℃</td>
+
                                                <td>4℃</td>
−
  <td>--</td>
+
                                                <td>--</td>
−
</tr>
+
                                              </tr>
−
</tbody>
+
                                            </tbody>
−
<table class="ui celled small table">
+
                                            <table class="ui celled small table">
−
<p>30 cycles(Duration ~ Extend)</p>
+
                                              <p>30 cycles(Duration ~ Extend)</p>
−
<p><strong>Recorder：Yu Xie</strong>
+
                                              <p><strong>Recorder：Yu Xie</strong>
−
<strong>Colony picking of sup35-sfGFP11</strong></p>
+
                                              <strong>Colony picking of sup35-sfGFP11</strong></p>
−
<p><strong>Ligation of YeWGAP and BD</strong>
+
                                              <p><strong>Ligation of YeWGAP and BD</strong>
−
**Recorder: Chenyang Li **</p>
+
                                              **Recorder: Chenyang Li **</p>
−
<p>Procedure:
+
                                              <p>Procedure:
−
9 μL  YeWGAPD8201002
+
                                                9 μL  YeWGAPD8201002
−
3.3 μL  BDD8201002
+
                                                3.3 μL  BDD8201002
−
0.2 μL T4 DNA ligase
+
                                                0.2 μL T4 DNA ligase
−
2 μL  10×T4 DNA Ligase Buffer
+
                                                2 μL  10×T4 DNA Ligase Buffer
−
5.5 μL ddH<sub>2</sub>O
+
                                                5.5 μL ddH<sub>2</sub>O
−
20 μL in total.</p>
+
                                              20 μL in total.</p>
−
<p>Mix gently and incubate at 22 degree Celsius for an hour.</p>
+
                                              <p>Mix gently and incubate at 22 degree Celsius for an hour.</p>
−
<p>The number of the product: YBL8201005, YBL8201006, YBL8201007, YBL8201008, YBL8201009.</p>
+
                                              <p>The number of the product: YBL8201005, YBL8201006, YBL8201007, YBL8201008, YBL8201009.</p>
−
<p><strong>Recorder: Chenyang Li</strong>
+
                                              <p><strong>Recorder: Chenyang Li</strong>
−
<strong>PCR of pYeWGAP-BD</strong></p>
+
                                              <strong>PCR of pYeWGAP-BD</strong></p>
−
<p><strong>Procedure:</strong></p>
+
                                              <p><strong>Procedure:</strong></p>
−
<p>3.Prepare 4 PCR of pYeWGAP-BD tubes and sequentially add：
+
                                              <p>3.Prepare 4 PCR of pYeWGAP-BD tubes and sequentially add：
−
4 μL Sterilized ddH<sub>2</sub>O,
+
                                                4 μL Sterilized ddH<sub>2</sub>O,
−
5 μL 2XHiFi Pfu,
+
                                                5 μL 2XHiFi Pfu,
−
0.5 μL primer F,
+
                                                0.5 μL primer F,
−
0.5 μL primer R,
+
                                                0.5 μL primer R,
−
0.5 μL DNA template.</p>
+
                                              0.5 μL DNA template.</p>
−
<p>4.PCR reaction
+
                                              <p>4.PCR reaction
−
Parameters setting：</p>
+
                                              Parameters setting：</p>
−
<table class="ui celled small table">
+
                                              <table class="ui celled small table">
−
<thead>
+
                                                <thead>
−
<tr>
+
                                                  <tr>
−
  <th>stage</th>
+
                                                    <th>stage</th>
−
  <th>temperature</th>
+
                                                    <th>temperature</th>
−
  <th>time</th>
+
                                                    <th>time</th>
−
</tr>
+
                                                  </tr>
−
</thead>
+
                                                </thead>
−
<tbody>
+
                                                <tbody>
−
<tr>
+
                                                  <tr>
−
  <td>step 1</td>
+
                                                    <td>step 1</td>
−
  <td>95℃</td>
+
                                                    <td>95℃</td>
−
  <td>10 min</td>
+
                                                    <td>10 min</td>
−
</tr>
+
                                                  </tr>
−
<tr>
+
                                                  <tr>
−
  <td>step 2</td>
+
                                                    <td>step 2</td>
−
  <td>95℃</td>
+
                                                    <td>95℃</td>
−
  <td>30 s</td>
+
                                                    <td>30 s</td>
−
</tr>
+
                                                  </tr>
−
<tr>
+
                                                  <tr>
−
  <td>step 3</td>
+
                                                    <td>step 3</td>
−
  <td>58℃</td>
+
                                                    <td>58℃</td>
−
  <td>45 s</td>
+
                                                    <td>45 s</td>
−
</tr>
+
                                                  </tr>
−
<tr>
+
                                                  <tr>
−
  <td>step 4</td>
+
                                                    <td>step 4</td>
−
  <td>72℃</td>
+
                                                    <td>72℃</td>
−
  <td>45 s</td>
+
                                                    <td>45 s</td>
−
</tr>
+
                                                  </tr>
−
<tr>
+
                                                  <tr>
−
  <td>step 5</td>
+
                                                    <td>step 5</td>
−
  <td>72℃</td>
+
                                                    <td>72℃</td>
−
  <td>10 min</td>
+
                                                    <td>10 min</td>
−
</tr>
+
                                                  </tr>
−
<tr>
+
                                                  <tr>
−
  <td>step 6</td>
+
                                                    <td>step 6</td>
−
  <td>4℃</td>
+
                                                    <td>4℃</td>
−
  <td>--</td>
+
                                                    <td>--</td>
−
</tr>
+
                                                  </tr>
−
</tbody>
+
                                                </tbody>
−
<table class="ui celled small table">
+
                                                <table class="ui celled small table">
−
<p>30 cycles(step 2 ~ step 4)</p>
+
                                                  <p>30 cycles(step 2 ~ step 4)</p>
−
<p>results:</p>
+
                                                  <p>results:</p>
−
<p><img src="https://static.igem.org/mediawiki/2016/thumb/6/65/T--USTC--NB_0820_3.jpeg/750px-T--USTC--NB_0820_3.jpeg" alt="a" />
+
                                                  <p><img src="https://static.igem.org/mediawiki/2016/thumb/6/65/T--USTC--NB_0820_3.jpeg/750px-T--USTC--NB_0820_3.jpeg" alt="a" />
−
(from left to right: Trans 2K plus 2(contain Gelred),YBE8241001，1，YBE8241002，2，YBE8241003，3，YBE8241004，4，YeWGAP08171001，YeWGAPD8191002，BDD8191002，YBL8201005，Sterilized ddH<sub>2</sub>O)
+
                                                    (from left to right: Trans 2K plus 2(contain Gelred),YBE8241001，1，YBE8241002，2，YBE8241003，3，YBE8241004，4，YeWGAP08171001，YeWGAPD8191002，BDD8191002，YBL8201005，Sterilized ddH<sub>2</sub>O)
−
</p>
+
                                                  </p>
−
<h2>Date: 8.26</h2>
+
                                                  <h2>Date: 8.26</h2>
−
<p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
+
                                                  <p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
−
<strong>PCR of sfGFP1-10</strong></p>
+
                                                  <strong>PCR of sfGFP1-10</strong></p>
−
<p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
+
                                                  <p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
−
<strong>Double Digestion of sfGFP1-10</strong></p>
+
                                                  <strong>Double Digestion of sfGFP1-10</strong></p>
−
<p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
+
                                                  <p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
−
<strong>Double Digestion of pSB1C3</strong></p>
+
                                                  <strong>Double Digestion of pSB1C3</strong></p>
−
<h2>Date: 8.27</h2>
+
                                                  <h2>Date: 8.27</h2>
−
<p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
+
                                                  <p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
−
<strong>Ligation of pSB1C3 and sfGFP1-10</strong></p>
+
                                                  <strong>Ligation of pSB1C3 and sfGFP1-10</strong></p>
−
<p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
+
                                                  <p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
−
<strong>Transformation of combinant plasmid pSB1C3 containing sfGFP1-10</strong></p>
+
                                                  <strong>Transformation of combinant plasmid pSB1C3 containing sfGFP1-10</strong></p>
−
<p><strong>Recorder：Yu Xie</strong>
+
                                                  <p><strong>Recorder：Yu Xie</strong>
−
<strong>Colony picking of combinant plasmid pSB1C3 containing sfGFP1-10</strong></p>
+
                                                  <strong>Colony picking of combinant plasmid pSB1C3 containing sfGFP1-10</strong></p>
−
<p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
+
                                                  <p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
−
<strong>PCR of sfGFP1-10</strong></p>
+
                                                  <strong>PCR of sfGFP1-10</strong></p>
−
<p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
+
                                                  <p><strong>Recorder: Yu Xie</strong>
−
<strong>Double Digestion of sfGFP1-10</strong></p>
+
                                                  <strong>Double Digestion of sfGFP1-10</strong></p>
−
<p><strong>Plasmid Extraction for plasmid C3BD35</strong>
+
                                                  <p><strong>Plasmid Extraction for plasmid C3BD35</strong>
−
<strong>Recorder: Xuefeng Meng</strong></p>
+
                                                  <strong>Recorder: Xuefeng Meng</strong></p>
−
<p><strong>results</strong></p>
+
                                                  <p><strong>results</strong></p>
−
<table class="ui celled small table">
+
                                                  <table class="ui celled small table">
−
<thead>
+
                                                    <thead>
−
<tr>
+
                                                      <tr>
−
  <th>sample</th>
+
                                                        <th>sample</th>
−
  <th>1</th>
+
                                                        <th>1</th>
−
  <th>2</th>
+
                                                        <th>2</th>
−
  <th>3</th>
+
                                                        <th>3</th>
−
</tr>
+
                                                      </tr>
−
</thead>
+
                                                    </thead>
−
<tbody>
+
                                                    <tbody>
−
<tr>
+
                                                      <tr>
−
  <td>A260/A280</td>
+
                                                        <td>A260/A280</td>
−
  <td>2.02</td>
+
                                                        <td>2.02</td>
−
  <td>1.90</td>
+
                                                        <td>1.90</td>
−
  <td>1.91</td>
+
                                                        <td>1.91</td>
−
</tr>
+
                                                      </tr>
−
<tr>
+
                                                      <tr>
−
  <td>A260/A230</td>
+
                                                        <td>A260/A230</td>
−
  <td>1.19</td>
+
                                                        <td>1.19</td>
−
  <td>1.07</td>
+
                                                        <td>1.07</td>
−
  <td>1.31</td>
+
                                                        <td>1.31</td>
−
</tr>
+
                                                      </tr>
−
<tr>
+
                                                      <tr>
−
  <td>concentration(ng/μL)</td>
+
                                                        <td>concentration(ng/μL)</td>
−
  <td>17.0</td>
+
                                                        <td>17.0</td>
−
  <td>15.5</td>
+
                                                        <td>15.5</td>
−
  <td>27.9</td>
+
                                                        <td>27.9</td>
−
</tr>
+
                                                      </tr>
−
</tbody>
+
                                                    </tbody>
−
</table>
+
                                                  </table>
−
<p><strong>PCR of sfGFP11</strong>
+
                                                  <p><strong>PCR of sfGFP11</strong>
−
<strong>Recorder: Xuefeng Meng</strong>
+
                                                    <strong>Recorder: Xuefeng Meng</strong>
−
<strong>results</strong>
+
                                                    <strong>results</strong>
−
<img src="https://static.igem.org/mediawiki/2016/6/6a/T--USTC--NB_0826_1.jpeg" />
+
                                                    <img src="https://static.igem.org/mediawiki/2016/6/6a/T--USTC--NB_0826_1.jpeg" />
−
         
+
                                                  </div>
−
        </div>
+
                                                  </div><!--End of ui basic segment id="main_page_content"-->
−
        </div><!--end of pusher-->
+
                                                 
−
        <script src="https://2015.igem.org/common/MathJax-2.5-latest/MathJax.js?config=TeX-AMS-MML_HTMLorMML"></script>
+
                                                  <div style="background-color:#44a17d; color:rgba(255, 255, 255, 0.9);">
−
        <script type="text/javascript" src="https://2016.igem.org/Template:USTC/semanticsjs?action=raw&ctype=text/javascript"></script>
+
                                                    <div class="ui grid">
−
        <script type="text/javascript" src="https://2016.igem.org/Template:USTC/Notebook_right_menu_js?action=raw&ctype=text/javascript"></script>
+
                                                     
−
        <script type="text/javascript">
+
                                                      <div class="ui three wide column">
−
        </script>
+
                                                      </div>
−
        <script>
+
                                                      <div class="ui five wide column">
−
        $(document).ready(function(){
+
                                                        <h3 class="ui header" style="color:rgba(255, 255, 255, 0.9);">Contact us</h3>
−
        $('.ui.sticky.basic.menu').sticky({
+
                                                        <div class="ui massive link list" style="color:rgba(255, 255, 255, 0.9);">
−
        context: '#main_page_content'
+
                                                          <a class="item" href="mailto:yukae@mail.ustc.edu.cn">
−
        });
+
                                                            <i class="mail icon" style="color:rgba(255, 255, 255, 0.9);"></i>
−
        $("a.item#Description").mouseenter(function(){
+
                                                            <div class="content" style="color:rgba(255, 255, 255, 0.9);">e-mail</div>
−
        $(".sticky.note.outline.icon").transition({
+
                                                          </a>
−
        animation : 'fly right',
+
                                                          <a class="item" href="https://www.facebook.com/ustcigem">
−
        duration : '0.5s'
+
                                                            <i class="facebook icon" style="color:rgba(255, 255, 255, 0.9);"></i>
−
        });
+
                                                            <div class="content" style="color:rgba(255, 255, 255, 0.9);">Facebook</div>
−
        });
+
                                                          </a>
−
        $("a.item#Description").mouseleave(function(){
+
                                                          <a class="item" href="http://weibo.com/3929719655/fans?topnav=1&amp;wvr=6&amp;mod=message&amp;need_filter=1">
−
        $(".sticky.note.outline.icon").transition({
+
                                                            <i class="weibo icon" style="color:rgba(255, 255, 255, 0.9);"></i>
−
        animation : 'fly right',
+
                                                            <div class="content" style="color:rgba(255, 255, 255, 0.9);">Weibo</div>
−
        duration : '0.5s'
+
                                                          </a>
−
        });
+
                                                        </div>
−
        //$(this).css({"background-color":"inherit","color":"inherit"});
+
                                                      </div>
−
        });
+
                                                      <div class="ui two wide column">
−
        $container.find('img').css('max-width','100%');
+
                                                      </div>
−
        createMenu();
+
                                                      <div class="ui five wide column">
−
        });//End of $(document).ready(function())
+
                                                        <h3 class="ui header" style="color:rgba(255, 255, 255, 0.9);">Sponsors</h3>
−
       
+
                                                        <img class="ui small image" src="https://static.igem.org/mediawiki/2016/c/cc/T--USTC--DeutscheBank.png">
−
        $(window).load(function(){
+
                                                        <img class="ui small image" src="https://static.igem.org/mediawiki/2016/1/18/T--USTC--USTCXiaohui.png">
−
        createWayPoints();
+
                                                        <img class="ui small image" src="https://static.igem.org/mediawiki/2016/4/45/T--USTC--USTCJiaowuchu.png">
−
        $("div.pusher").prependTo("body");
+
                                                      </div>
−
        $("div.sidebar").prependTo("body");
+
                                                     
−
        $("div#sideMenu").prependTo("div.pusher");
+
                                                    </div>
−
        $("#ui_article").find("span").css("border-style","none");
+
                                                    <div class="ui divider"></div>
−
        });
+
                                                    <div class="center aligned container">
−
        $("#sidebarMenuTrigger").click(function(){
+
                                                      <img class="ui centered tiny image" src="https://static.igem.org/mediawiki/2016/6/6b/T--USTC--MascotLogo.png">
−
        $(".ui.sidebar.menu")
+
                                                      <div class="ui list">
−
        .sidebar('setting', 'transition', 'overlay')
+
                                                        <div class="item">Designed by 2016 iGEM Team:USTC<br>Under CC License<br>Based on Semantic-UI</div>
−
        .sidebar('setting', 'mobileTransition', 'overlay')
+
                                                      </div>
−
        .sidebar('toggle');
+
                                                    </div>
−
        });
+
                                                   
−
        </script>
+
                                                  </div>
−
      </body>
+
                                                  </div><!--end of pusher-->
−
    </html>
+
                                                  <script src="https://2015.igem.org/common/MathJax-2.5-latest/MathJax.js?config=TeX-AMS-MML_HTMLorMML"></script>
 +
                                                  <script type="text/javascript" src="https://2016.igem.org/Template:USTC/semanticsjs?action=raw&ctype=text/javascript"></script>
 +
                                                  <script type="text/javascript" src="https://2016.igem.org/Template:USTC/Notebook_right_menu_js?action=raw&ctype=text/javascript"></script>
 +
                                                  <script type="text/javascript">
 +
                                                  </script>
 +
                                                  <script>
 +
                                                  $(document).ready(function(){
 +
                                                  $('.ui.sticky.basic.menu').sticky({
 +
                                                  context: '#main_page_content'
 +
                                                  });
 +
                                                  $("a.item#Description").mouseenter(function(){
 +
                                                  $(".sticky.note.outline.icon").transition({
 +
                                                  animation : 'fly right',
 +
                                                  duration : '0.5s'
 +
                                                  });
 +
                                                  });
 +
                                                  $("a.item#Description").mouseleave(function(){
 +
                                                  $(".sticky.note.outline.icon").transition({
 +
                                                  animation : 'fly right',
 +
                                                  duration : '0.5s'
 +
                                                  });
 +
                                                  //$(this).css({"background-color":"inherit","color":"inherit"});
 +
                                                  });
 +
                                                  $container.find('img').css('max-width','100%');
 +
                                                  createMenu();
 +
                                                  });//End of $(document).ready(function())
 +
                                                 
 +
                                                  $(window).load(function(){
 +
                                                  createWayPoints();
 +
                                                  $("div.pusher").prependTo("body");
 +
                                                  $("div.sidebar").prependTo("body");
 +
                                                  $("div#sideMenu").prependTo("div.pusher");
 +
                                                  $("#ui_article").find("span").css("border-style","none");
 +
                                                  });
 +
                                                  $("#sidebarMenuTrigger").click(function(){
 +
                                                  $(".ui.sidebar.menu")
 +
                                                  .sidebar('setting', 'transition', 'overlay')
 +
                                                  .sidebar('setting', 'mobileTransition', 'overlay')
 +
                                                  .sidebar('toggle');
 +
                                                  });
 +
                                                  </script>
 +
                                                </body>
 +
                                              </html>

Latest revision as of 18:27, 19 October 2016

Modeling

Home
Project
Description Design Proof of Concept Demonstrate Results Notebook Spin-off
Parts
Basic Parts Composite Parts Part Collection
Safety Attributions
Human Practices
Silver Gold Integrated Practices Engagement
Awards
Model
Team
Members Sponsor About USTC Acknowledgements Gallery Collaborations

Notebook
Together we stand

Performers

Everybody

DATE：8.24

Recorder: Yu Xie Plasmid Extraction for sfGFP11

Recorder: Yu Xie PCR of sup35

Procedure:

1.Prepare 8 PCR tubes and sequentially add：

sample 1,2,3,4,5,6,7,8
Sterilized ddH2O 9 μL
2×HiFi-PCR Master 12.5 μL
Template 1.5 μL
Primer 1 1 μL
Primer 2 1 μL
total 25 μL

2.PCR reaction Parameters setting：

stage temperature time
Pre-Duration 95℃ 10 min
Duration 95℃ 1 min
Anneal 58℃ 1 min
Extend 72℃ 1 min 50 s
Post-Extend 72℃ 10 min
Final 4℃ --

30 cycles(Duration ~ Extend)

Recorder: Yu Xie Double digestion of sup35

Recorder：Yu Xie Ligation of sup35 and pUC57-sfGFP11

Recorder: Yu Xie Transformation of combinant plasmid pUC57 containing sup35-sfGFP11

Recorder: Yu Xie PCR of sup35

Procedure:

1.Prepare 8 PCR tubes and sequentially add：

sample 1,2,3,4,5,6,7,8
Sterilized ddH2O 9 μL
2×HiFi-PCR Master 12.5 μL
Template 1.5 μL
Primer 1 1 μL
Primer 2 1 μL
total 25 μL

2.PCR reaction Parameters setting：

stage temperature time
Pre-Duration 95℃ 10 min
Duration 95℃ 1 min
Anneal 58℃ 1 min
Extend 72℃ 1 min 50s
Post-Extend 72℃ 10 min
Final 4℃ --

30 cycles(Duration ~ Extend)

Recorder：Yu Xie Colony picking of sfGFP11

Recorder: Chenyang Li PCR of pYeWGAP-BD

Procedure:

3.Prepare 4 PCR of pYeWGAP-BD tubes and sequentially add： 4 μL Sterilized ddH2O, 6.5 μL 2XHiFi Pfu, 0.5 μL primer F, 0.5 μL primer R, 1 μL DNA template.

4.PCR reaction Parameters setting：

stage temperature time
step 1 95℃ 10 min
step 2 95℃ 30 s
step 3 58℃ 45 s
step 4 72℃ 45 s
step 5 72℃ 10 min
step 6 4℃ --

30 cycles(step 2 ~ step 4)

results:

a (from left to right: Trans 2K plus 2(contain Gelred), 1, 2, 3, 4)

Plasmid Extraction for ligased YeWGAP and BD Recorder: Chenyang Li

results

sample YBE8241001 YBE8241002 YBE8241003 YBE8241004
A260/A280 1.88 1.86 1.89 1.88
A260/A230 2.27 1.92 2.22 2.22
concentration(ng/μL) 203.1 174.7 181.3 177.8

DATE：8.24 Recorder: Chenyang Li PCR of pYeWGAP-BD

Procedure:

3.Prepare 4 PCR of pYeWGAP-BD tubes and sequentially add： 3 μL Sterilized ddH2O, 5 μL 2XHiFi Pfu, 0.5 μL primer F, 0.5 μL primer R, 1 μL DNA template.

4.PCR reaction Parameters setting：

stage temperature time
step 1 95℃ 10 min
step 2 95℃ 30 s
step 3 58℃ 45 s
step 4 72℃ 45 s
step 5 72℃ 10 min
step 6 4℃ --

30 cycles(step 2 ~ step 4)

results:

a (from left to right: Trans 2K plus 2(contain Gelred),YBE8241001，1，YBE8241002，2，YBE8241003，3，YBE8241004，4，)

DATE:8.25

Recorder: Yu Xie Plasmid Extraction for sfGFP11

Recorder: Yu Xie Transformation of combinant plasmid pUC57 containing sup35-sfGFP11

Recorder: Yu Xie PCR of sup35

Procedure:

1.Prepare 8 PCR tubes and sequentially add：

sample 1,2,3,4,5,6,7,8
Sterilized ddH2O 9 μL
2×HiFi-PCR Master 12.5 μL
Template 1.5 μL
Primer 1 1 μL
Primer 2 1 μL
total 25 μL

2.PCR reaction Parameters setting：

stage temperature time
Pre-Duration 95℃ 10 min
Duration 95℃ 1 min
Anneal 58℃ 1 min
Extend 72℃ 1 min 50 s
Post-Extend 72℃ 10 min
Final 4℃ --

30 cycles(Duration ~ Extend)

Recorder：Yu Xie Colony picking of sup35-sfGFP11

Ligation of YeWGAP and BD **Recorder: Chenyang Li **

Procedure: 9 μL YeWGAPD8201002 3.3 μL BDD8201002 0.2 μL T4 DNA ligase 2 μL 10×T4 DNA Ligase Buffer 5.5 μL ddH2O 20 μL in total.

Mix gently and incubate at 22 degree Celsius for an hour.

The number of the product: YBL8201005, YBL8201006, YBL8201007, YBL8201008, YBL8201009.

Recorder: Chenyang Li PCR of pYeWGAP-BD

Procedure:

3.Prepare 4 PCR of pYeWGAP-BD tubes and sequentially add： 4 μL Sterilized ddH2O, 5 μL 2XHiFi Pfu, 0.5 μL primer F, 0.5 μL primer R, 0.5 μL DNA template.

4.PCR reaction Parameters setting：

stage temperature time
step 1 95℃ 10 min
step 2 95℃ 30 s
step 3 58℃ 45 s
step 4 72℃ 45 s
step 5 72℃ 10 min
step 6 4℃ --

30 cycles(step 2 ~ step 4)

results:

a (from left to right: Trans 2K plus 2(contain Gelred),YBE8241001，1，YBE8241002，2，YBE8241003，3，YBE8241004，4，YeWGAP08171001，YeWGAPD8191002，BDD8191002，YBL8201005，Sterilized ddH2O)

Date: 8.26

Recorder: Yu Xie PCR of sfGFP1-10

Recorder: Yu Xie Double Digestion of sfGFP1-10

Recorder: Yu Xie Double Digestion of pSB1C3

Date: 8.27

Recorder: Yu Xie Ligation of pSB1C3 and sfGFP1-10

Recorder: Yu Xie Transformation of combinant plasmid pSB1C3 containing sfGFP1-10

Recorder：Yu Xie Colony picking of combinant plasmid pSB1C3 containing sfGFP1-10

Recorder: Yu Xie PCR of sfGFP1-10

Recorder: Yu Xie Double Digestion of sfGFP1-10

Plasmid Extraction for plasmid C3BD35 Recorder: Xuefeng Meng

results

sample 1 2 3
A260/A280 2.02 1.90 1.91
A260/A230 1.19 1.07 1.31
concentration(ng/μL) 17.0 15.5 27.9

PCR of sfGFP11 Recorder: Xuefeng Meng results

Contact us

e-mail
Facebook
Weibo

Sponsors

Designed by 2016 iGEM Team:USTC
Under CC License
Based on Semantic-UI