Difference between revisions of "Team:Ionis Paris/10 06 16"

 
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        <!-- Nos feuilles de style -->
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                                    <h4 class="blog_topHd">
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                                <h2 class="blog_topHd"> <font color =”#279AD3”>  
                                     Transformation efficiency test : Competent BL21 cells with pSB1C3-RFP plasmid</h4>
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                                     Transformation efficiency test : Competent BL21 cells with pSB1C3-RFP plasmid</font></h2>
 
                                   </div>                                             
 
                                   </div>                                             
                                    <h4 class="blog_topHd">Objectives</h4>                      
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                              <h3><font color =”94FAF1”> Objectives </font></h3>                    
 
             <p>To test the competency of the BL21 cells done on the 09/06/16 with the stock of pSB1C3-RFP plasmid.</p>
 
             <p>To test the competency of the BL21 cells done on the 09/06/16 with the stock of pSB1C3-RFP plasmid.</p>
                                    <h4 class="blog_topHd">Materials</h4>
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<h3><font color =”94FAF1”> Materials </font></h3>
 
                                  
 
                                  
 
                               <li><p>Plasmid DNA : pSB1C3-RFP at 200 pg/µL</p>
 
                               <li><p>Plasmid DNA : pSB1C3-RFP at 200 pg/µL</p>
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                               </li>
 
                               </li>
  
                                            <h4 class="blog_topHd">Protocol</h4>
+
                  <h3><font color =”94FAF1”> Protocol </font></h3>
  
 
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                                 <figure class="postImg waves-effect">
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                           </ol>
 
                           </ol>
  
                                          <h4 class="blog_topHd">Results</h4>
+
                <h3><font color =”94FAF1”> Results </font></h3>
 
+
<p><font color= ”46BB0A”> Expected results :</font></p>
<b>Expected results :</b>
+
 
<p>Some colonies on the petri dishes LB+Cm plated with 1% of transformed bacteria, more with 10%, a lot with 100% and a bacterial lawn with the pellet.<br/>
 
<p>Some colonies on the petri dishes LB+Cm plated with 1% of transformed bacteria, more with 10%, a lot with 100% and a bacterial lawn with the pellet.<br/>
 
A bacterial lawn is expected on the LB petri dishes (+ control).<br/>
 
A bacterial lawn is expected on the LB petri dishes (+ control).<br/>
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All obtained colonies are expected to be red because of the RFP gene that codes for a red fluorescent protein.</p>
 
All obtained colonies are expected to be red because of the RFP gene that codes for a red fluorescent protein.</p>
  
<p><b>Obtained results:</b><br/>
+
<p> <font color= ”46BB0A”> Obtained results:</font><br/>
 
We obtained expected results.</p>
 
We obtained expected results.</p>
  
  
                                          <h4 class="blog_topHd">Interpretation</h4>
+
                        <h3><font color =”94FAF1”> Interpretation</font></h3>
 
<p>The transformation worked, as we obtained satisfying results. Colonies contain a plasmid with the Chloramphenicol resistance gene, present in pSB1C3. The BL21 cells are therefore competent.</p>
 
<p>The transformation worked, as we obtained satisfying results. Colonies contain a plasmid with the Chloramphenicol resistance gene, present in pSB1C3. The BL21 cells are therefore competent.</p>
  
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                                 <h4>More about us</h4>
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                                 <h4>iGEM IONIS</h4>
                                 <p>If you’ve followed along and done the steps above, you’ve created a good starting place. You’re going to need to make sure your pages are optimized properly. This will ensure you get your page ranked high in the search engines. ou’re going to need to make sure your pages are optimized properly.
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                                 <p> We're a group of six different schools from the IONIS Education Group. For this
            Read More</p>
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                                    competition we wanted to take advantages of the multiple schools and activity field
                              <a href="#">Read More</a>
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                                    given by the IONIS education group to create a solid project.</p>
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                                <a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris/Team">Read More</a>
 
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                                             <span>Location: Lorance Road 542B,5248 MT, Wordwide Country</span>
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                                             <span>Location: 66 Rue Guy Môquet, 94800 Villejuif, France</span>
                                        </li>
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                                            <a href="tel:123-456-7890">Phone: 123-456-7890</a>
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                                             <a href="mailto:contact@domain.com">email: contact@domain.com</a>
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                                 <h4>Galleries</h4>
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                                 <h4>Download the app</h4>
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                                         <li><a href="#">Services</a></li>
+
                                         <li><a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris/Working_at_La_Paillasse">in the Lab</a></li>
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                                         <li><a href="#">Portfolio</a></li>
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                                         <li><a href="#">Blog </a></li>
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                                         <li><a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris/HPintro">Human
                                         <li><a href="#">Contact US</a></li>
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                                            Practice</a></li>
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                                     <p>©2016 Design by <a href="https://www.behance.net/googoling">Faridul Haque</a> and Develop by <a href="http://themeebit.com">ThemeeBiT</a>.</p>  
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                                     <p>©IONIS_IGEM_2016</a>.</p>
 
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Latest revision as of 19:57, 19 October 2016

Transformation efficiency test : Competent BL21 cells with pSB1C3-RFP plasmid

Objectives

To test the competency of the BL21 cells done on the 09/06/16 with the stock of pSB1C3-RFP plasmid.

Materials

  • Plasmid DNA : pSB1C3-RFP at 200 pg/µL

  • BL21 competent cells (See 09/06/16)

  • Petri dish LB+Cm: Cm concentration = 25 µg/mL

  • Protocol

    1. Thaw 1 tube of BL21 competent cells on ice for 10 min. Mix gently and carefully pipette 50 µL of cells into 2 transformation tubes on ice.

    2. Add 1 µL (200 pg) of plasmid DNA to the cell mixture. Carefully flick the tube 4-5 times to mix cells and DNA. Do not vortex.

    3. Place the mixture on ice for 30 min. Do not mix.

    4. Heat shock at exactly 42°C for 30 s. Do not mix.

    5. Place on ice for 5 min. Do not mix.

    6. Pipette 950 µL of room temperature SOC into the mixture.

    7. Place at 37°C for 60 min at 250 rpm.

    8. Warm selection plates to 25°C.

    9. Mix the cells thoroughly by flicking the tube and inverting.

    10. Spread 100 µL of each dilution (100%,10%,1%) onto a selection plate.

    11. Pellet the remaining cells (except for the control), discard mostly all the supernatant and resuspend the remaining cells in 100 µL of LB. Spread 100 µL onto a selection plate.

    12. Incubate all the plates O/N at 37°C.

    Results

    Expected results :

    Some colonies on the petri dishes LB+Cm plated with 1% of transformed bacteria, more with 10%, a lot with 100% and a bacterial lawn with the pellet.
    A bacterial lawn is expected on the LB petri dishes (+ control).
    No colony is expected on the LB+Cm petri dish plated with no plasmid (- control).
    All obtained colonies are expected to be red because of the RFP gene that codes for a red fluorescent protein.

    Obtained results:
    We obtained expected results.

    Interpretation

    The transformation worked, as we obtained satisfying results. Colonies contain a plasmid with the Chloramphenicol resistance gene, present in pSB1C3. The BL21 cells are therefore competent.

    Creative and impressive building

    How you can be a super creative

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