Difference between revisions of "Team:Ionis Paris/Protocol 6"

Line 37: Line 37:
 
                                 <div class="blog_top">
 
                                 <div class="blog_top">
 
                                     <h4 class="blog_topHd">
 
                                     <h4 class="blog_topHd">
−
                                       Protocol 6 : E.Coli dh5a and BL21 transformation (Heat-shock)
+
                                       Protocol 6 : E.Coli Dh5α and BL21 transformation (Heat-shock)
 
                                     </h4>
 
                                     </h4>
 
                                     <div class="blog">
 
                                     <div class="blog">
Line 51: Line 51:
 
                                     <p>Thaw a tube of DH5-alpha competent cells on ice for 10 min.<br/>
 
                                     <p>Thaw a tube of DH5-alpha competent cells on ice for 10 min.<br/>
 
                                           Mix gently and carefully pipette 50 µL of cells into a transformation tube on ice<br/>
 
                                           Mix gently and carefully pipette 50 µL of cells into a transformation tube on ice<br/>
−
                                           Add 30 µL of plasmid DNA to the cell mixture (one tube for each ratio)<br/>
+
                                           Add 1-5µL plasmid DNA to the cell mixture (one tube for each ratio)<br/>
 
                                           Carefully flick the tube 4-5 times to mix cells and DNA. Do not vortex.<br/>
 
                                           Carefully flick the tube 4-5 times to mix cells and DNA. Do not vortex.<br/>
 
                                           Place the mixture on ice for 30 min. Do not mix.<br/>
 
                                           Place the mixture on ice for 30 min. Do not mix.<br/>
 
                                           Heat shock at exactly 42°C for 45 s. Do not mix.<br/>
 
                                           Heat shock at exactly 42°C for 45 s. Do not mix.<br/>
 
                                           Place on ice for 5 min. Do not mix.<br/>
 
                                           Place on ice for 5 min. Do not mix.<br/>
−
                                           Pipette 250 µL of room temperature SOC into the mixture.<br/>
+
                                           Pipette 250µL of room temperature SOC into the mixture.<br/>
 
                                           Place at 37°C for 60 min at 250 rpm.<br/>
 
                                           Place at 37°C for 60 min at 250 rpm.<br/>
 
                                           Warm selection plates to 25°C.<br/>
 
                                           Warm selection plates to 25°C.<br/>
−
                                           Mix the cells thoroughly by flicking the tube and inverting.<br/>
+
                                           Mix the cells by flicking the tube and inverting.<br/>
−
                                           Spread 100 µL of cells onto selection plates.<br/>
+
                                           Spread 100µL of cells onto selection plates.<br/>
 
                                           Incubate all the plates O/N at 37°C.<br/>
 
                                           Incubate all the plates O/N at 37°C.<br/>
  
Line 135: Line 135:
 
                                         </a>
 
                                         </a>
 
                                     </li>
 
                                     </li>
 +
                               
 
                                     <li>
 
                                     <li>
 
                                             <a href="https://2016.igem.org/Protocol_1">
 
                                             <a href="https://2016.igem.org/Protocol_1">
−
                                            <span>LB Media (see Protocol 1)</span>
+
                                             <span>LB + antibiotic plates (see Protocol 1)</span>  
−
                                       
+
−
                                         
+
−
                                        </a>
+
−
                                    </li>
+
−
                                    <li>
+
−
                                            <a href="https://2016.igem.org/Protocol_1">
+
−
                                             <span>LB+ antibiotic plates (see Protocol 1)</span>  
+
 
                                          
 
                                          
 
                                            
 
                                            
Line 166: Line 160:
 
                                     <li>
 
                                     <li>
 
                                             <span>Incubator</span>
 
                                             <span>Incubator</span>
−
                                    </li>
 
−
                                    <li>
 
−
 
−
                                            <span>Ice</span>
 
−
                                       
 
−
                                         
 
−
                                        </a>
 
 
                                     </li>
 
                                     </li>
 
                                    
 
                                    

Revision as of 15:04, 16 October 2016

Protocol 6 : E.Coli Dh5α and BL21 transformation (Heat-shock)

Aim: Introduce plasmid DNA in E.Coli bacteria

Thaw a tube of DH5-alpha competent cells on ice for 10 min.
Mix gently and carefully pipette 50 µL of cells into a transformation tube on ice
Add 1-5µL plasmid DNA to the cell mixture (one tube for each ratio)
Carefully flick the tube 4-5 times to mix cells and DNA. Do not vortex.
Place the mixture on ice for 30 min. Do not mix.
Heat shock at exactly 42°C for 45 s. Do not mix.
Place on ice for 5 min. Do not mix.
Pipette 250µL of room temperature SOC into the mixture.
Place at 37°C for 60 min at 250 rpm.
Warm selection plates to 25°C.
Mix the cells by flicking the tube and inverting.
Spread 100µL of cells onto selection plates.
Incubate all the plates O/N at 37°C.