Difference between revisions of "Team:Ionis Paris/Protocol 6"

 
(5 intermediate revisions by 4 users not shown)
Line 7: Line 7:
 
         <link href='https://fonts.googleapis.com/css?family=Open+Sans:400,600,700,600italic,400italic,700italic,300,300italic' rel='stylesheet' type='text/css'>
 
         <link href='https://fonts.googleapis.com/css?family=Open+Sans:400,600,700,600italic,400italic,700italic,300,300italic' rel='stylesheet' type='text/css'>
  
−
        <!-- Nos feuilles de style -->
+
  <!-- Nos feuilles de style -->
−
        <link rel="stylesheet" type="text/css" href="https://2016.igem.org/Template:IONIS_Paris-test?action=raw&ctype=text/css" />
+
    <link rel="stylesheet" type="text/css" href="https://2016.igem.org/Template:IONIS_Paris-style-css-template?action=raw&ctype=text/css" />
−
        <link rel="stylesheet" type="text/css" href="https://2016.igem.org/Template:IONIS_Paris-style-css?action=raw&ctype=text/css" />
+
    <link rel="stylesheet" type="text/css" href="https://2016.igem.org/Template:IONIS_Paris-style-css?action=raw&ctype=text/css" />
 
          
 
          
 
        
 
        
Line 18: Line 18:
 
                     <div class="col-sm-12">
 
                     <div class="col-sm-12">
 
                         <div class="banner_title" >
 
                         <div class="banner_title" >
−
                             <h1>Protocol 6</h1>
+
                             <h1 id="back_to_the_top">Protocol 6</h1>
 
                              
 
                              
 
                         </div>
 
                         </div>
Line 37: Line 37:
 
                                 <div class="blog_top">
 
                                 <div class="blog_top">
 
                                     <h4 class="blog_topHd">
 
                                     <h4 class="blog_topHd">
−
                                       Protocol 6 : E.Coli dh5a and BL21 transformation (Heat-shock)
+
                                       Protocol 6 : E.Coli Dh5α and BL21 transformation (Heat-shock)
 
                                     </h4>
 
                                     </h4>
 
                                     <div class="blog">
 
                                     <div class="blog">
Line 51: Line 51:
 
                                     <p>Thaw a tube of DH5-alpha competent cells on ice for 10 min.<br/>
 
                                     <p>Thaw a tube of DH5-alpha competent cells on ice for 10 min.<br/>
 
                                           Mix gently and carefully pipette 50 µL of cells into a transformation tube on ice<br/>
 
                                           Mix gently and carefully pipette 50 µL of cells into a transformation tube on ice<br/>
−
                                           Add 30 µL of plasmid DNA to the cell mixture (one tube for each ratio)<br/>
+
                                           Add 1-5µL plasmid DNA to the cell mixture (one tube for each ratio)<br/>
 
                                           Carefully flick the tube 4-5 times to mix cells and DNA. Do not vortex.<br/>
 
                                           Carefully flick the tube 4-5 times to mix cells and DNA. Do not vortex.<br/>
 
                                           Place the mixture on ice for 30 min. Do not mix.<br/>
 
                                           Place the mixture on ice for 30 min. Do not mix.<br/>
 
                                           Heat shock at exactly 42°C for 45 s. Do not mix.<br/>
 
                                           Heat shock at exactly 42°C for 45 s. Do not mix.<br/>
 
                                           Place on ice for 5 min. Do not mix.<br/>
 
                                           Place on ice for 5 min. Do not mix.<br/>
−
                                           Pipette 250 µL of room temperature SOC into the mixture.<br/>
+
                                           Pipette 250µL of room temperature SOC into the mixture.<br/>
 
                                           Place at 37°C for 60 min at 250 rpm.<br/>
 
                                           Place at 37°C for 60 min at 250 rpm.<br/>
 
                                           Warm selection plates to 25°C.<br/>
 
                                           Warm selection plates to 25°C.<br/>
−
                                           Mix the cells thoroughly by flicking the tube and inverting.<br/>
+
                                           Mix the cells by flicking the tube and inverting.<br/>
−
                                           Spread 100 µL of cells onto selection plates.<br/>
+
                                           Spread 100µL of cells onto selection plates.<br/>
 
                                           Incubate all the plates O/N at 37°C.<br/>
 
                                           Incubate all the plates O/N at 37°C.<br/>
  
Line 135: Line 135:
 
                                         </a>
 
                                         </a>
 
                                     </li>
 
                                     </li>
 +
                               
 
                                     <li>
 
                                     <li>
 
                                             <a href="https://2016.igem.org/Protocol_1">
 
                                             <a href="https://2016.igem.org/Protocol_1">
−
                                            <span>LB Media (see Protocol 1)</span>
+
                                             <span>LB + antibiotic plates (see Protocol 1)</span>  
−
                                       
+
−
                                         
+
−
                                        </a>
+
−
                                    </li>
+
−
                                    <li>
+
−
                                            <a href="https://2016.igem.org/Protocol_1">
+
−
                                             <span>LB+ antibiotic plates (see Protocol 1)</span>  
+
 
                                          
 
                                          
 
                                            
 
                                            
Line 166: Line 160:
 
                                     <li>
 
                                     <li>
 
                                             <span>Incubator</span>
 
                                             <span>Incubator</span>
−
                                    </li>
 
−
                                    <li>
 
−
 
−
                                            <span>Ice</span>
 
−
                                       
 
−
                                         
 
−
                                        </a>
 
 
                                     </li>
 
                                     </li>
 
                                    
 
                                    
 
                                 </ul>
 
                                 </ul>
 +
</aside>
 
                             </div>
 
                             </div>
 
                           <h4 class="sidebar_Hd">Sources</h4>   
 
                           <h4 class="sidebar_Hd">Sources</h4>   
−
               <p><li><a href="https://www.neb.com/protocols/2012/05/21/transformation-protocol">NEB Transformation Protocol</a></li></p>
+
               <p><li><a href="https://www.neb.com/protocols/2012/05/21/transformation-protocol"><font color="DeepPink">NEB Transformation Protocol</font></a></li></p>
  
−
               <p><li><a href="https://www.addgene.org/plasmid-protocols/bacterial-transformation/">Addgene Bacterial Transformation protocol</a></li></p>
+
               <p><li><a href="https://www.addgene.org/plasmid-protocols/bacterial-transformation/"><font color="DeepPink">Addgene Bacterial Transformation protocol</font></a></li></p>
−
                         </aside>
+
                          
 
                     </div>
 
                     </div>
 
                 </div>
 
                 </div>
Line 189: Line 177:
 
          
 
          
 
   
 
   
−
        <!-- ====START SOCIAL Link==== -->
+
  <!-- ====START SOCIAL Link==== -->
−
        <div class="footer_social">
+
    <div class="footer_social">
−
            <div class="container-fluid">
+
        <div class="container-fluid">
−
                <div class="row">
+
            <div class="row">
−
                    <ul class="ft_top clearfix">
+
                <ul class="ft_top clearfix">
−
                        <li class="waves-effect waves-light">
+
                    <li class="waves-effect waves-light">
−
                            <a href="https://www.facebook.com/ionisigem/?fref=ts" target="_blank">
+
                        <a href="https://www.facebook.com/ionisigem/?fref=ts" target="_blank">
−
                                <i class="zmdi zmdi-facebook "></i>Facebook
+
                            <i class="zmdi zmdi-facebook "></i>Facebook
−
                            </a>
+
                        </a>
−
                        </li>  
+
                    </li>
−
                        <li class="waves-effect waves-light">
+
                    <li class="waves-effect waves-light">
−
                            <a href="https://twitter.com/igem_ionis" target="_blank">
+
                        <a href="https://twitter.com/igem_ionis" target="_blank">
−
                                <i class="zmdi zmdi-twitter"></i>Twitter
+
                            <i class="zmdi zmdi-twitter"></i>Twitter
−
                            </a>
+
                        </a>
−
                        </li>  
+
                    </li>
−
                        <li class="waves-effect waves-light">
+
                    <li class="waves-effect waves-light">
−
                            <a href="https://www.youtube.com/channel/UC0RyQsB5YpweSRBYQlAdZDA" target="_blank">
+
                        <a href="https://www.youtube.com/channel/UC0RyQsB5YpweSRBYQlAdZDA" target="_blank">
−
                                <i class="zmdi zmdi-youtube"></i>youtube
+
                            <i class="zmdi zmdi-youtube"></i>youtube
−
                            </a>
+
                        </a>
−
                        </li>  
+
                    </li>
−
                        <li class="waves-effect waves-light">
+
                    <li class="waves-effect waves-light">
−
                            <a href="https://www.linkedin.com/company/igem-ionis" target="_blank">
+
                        <a href="https://www.linkedin.com/company/igem-ionis" target="_blank">
−
                                <i class="zmdi zmdi-linkedin"></i>LinkedIn
+
                            <i class="zmdi zmdi-linkedin"></i>LinkedIn
−
                            </a>
+
                        </a>
−
                        </li>  
+
                    </li>
−
+
 
−
                    </ul>
+
                </ul>
−
                </div>
+
 
             </div>
 
             </div>
 
         </div>
 
         </div>
−
        <!-- ====END FOOTER TOP==== -->
+
    </div>
−
       
+
    <!-- ====END FOOTER TOP==== -->
−
        <!-- ====START FOOTER AREA==== -->
+
 
−
        <footer class="footer_area">
+
    <!-- ====START FOOTER AREA==== -->
−
            <div class="footer_middle">
+
    <footer class="footer_area">
−
                <div class="container">
+
        <div class="footer_middle">
−
                    <div class="row">
+
            <div class="container">
−
                        <div class="col-xs-12">
+
                <div class="row">
−
                            <div class="scroll_area">
+
                    <div class="col-xs-12">
−
                                <div class="sroll_top">
+
                        <div class="scroll_area">
−
                                  <a href="#ancre"> <i class="zmdi zmdi-chevron-up btn waves-effect"> </i> </a> 
+
                            <div class="sroll_top">
−
                                </div>
+
                                <a href="#ancre"> <i class="zmdi zmdi-chevron-up btn waves-effect"> </i> </a>
 
                             </div>
 
                             </div>
 
                         </div>
 
                         </div>
 
                     </div>
 
                     </div>
 +
                </div>
 +
                <div class="row">
 
                     <div class="row">
 
                     <div class="row">
−
                      <div class="row">
 
 
                         <div class="col-lg-5 col-md-5 col-sm-12">
 
                         <div class="col-lg-5 col-md-5 col-sm-12">
 
                             <div class="middle_content">
 
                             <div class="middle_content">
−
                                 <h4>IONIS IGEM</h4>
+
                                 <h4>iGEM IONIS</h4>
−
                                 <p> We're a group of six different schools from the IONIS Education Group. For this competition we wanted to take advantages of the multiple schools and activity field given by the IONIS education group to create a solid project.</p>
+
                                 <p> We're a group of six different schools from the IONIS Education Group. For this
−
                              <a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris/Team">Read More</a>
+
                                    competition we wanted to take advantages of the multiple schools and activity field
 +
                                    given by the IONIS education group to create a solid project.</p>
 +
                                <a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris/Team">Read More</a>
 
                             </div>
 
                             </div>
 
                         </div>
 
                         </div>
−
             
+
 
 
                         <div class="col-lg-3 col-lg-offset-1 col-md-4 col-sm-7">
 
                         <div class="col-lg-3 col-lg-offset-1 col-md-4 col-sm-7">
 
                             <div class="footer_Widgets">
 
                             <div class="footer_Widgets">
Line 256: Line 246:
 
                                             <a href="mailto:igem.ionis@gmail.com">email: igem.ionis@gmail.com</a>
 
                                             <a href="mailto:igem.ionis@gmail.com">email: igem.ionis@gmail.com</a>
 
                                         </li>
 
                                         </li>
−
                                     
+
 
 
                                     </ul>
 
                                     </ul>
 
                                 </div>
 
                                 </div>
 
                             </div>
 
                             </div>
 
                         </div>
 
                         </div>
 +
                    <div class="col-lg-3 col-md-3 col-sm-5">
 +
                            <div class="footer_Widgets">
 +
                                <h4>Download the app</h4>
 +
                                <a href="https://itunes.apple.com/us/app/quantifly/id1166875690?ls=1&mt=8"
 +
                                  target="_blank" style="target-new: tab;">
 +
                                    <figure class="widget_gallery">
 +
                                        <div class="RXcircleEffect"></div>
 +
                                        <img src="https://static.igem.org/mediawiki/2016/8/8d/IONIS_IGEM_paris_logo_apple.png"
 +
                                            alt="" />
 +
                                        <figcaption>
 +
                                            <i class="zmdi zmdi-link"></i>
 +
                                        </figcaption>
 +
                                    </figure>
 +
                                </a>
 +
                                <a href="https://play.google.com/store/apps/details?id=fr.plnech.quantifly&hl=en"
 +
                                  target="_blank" style="target-new: tab;">
 +
                                    <figure class="widget_gallery">
 +
                                        <div class="RXcircleEffect"></div>
 +
                                        <img src="https://static.igem.org/mediawiki/2016/6/65/IONIS_IGEM_paris_google_play.png"
 +
                                            alt="" />
 +
                                        <figcaption>
 +
                                            <i class="zmdi zmdi-link"></i>
 +
                                        </figcaption>
 +
                                    </figure>
 +
                                </a>
  
−
                          
+
                       
 +
                            </div>
 +
                         </div>
  
 
                     </div>
 
                     </div>
Line 274: Line 291:
 
                             <div class="col-md-7 fix_p_l">
 
                             <div class="col-md-7 fix_p_l">
 
                                 <nav>
 
                                 <nav>
−
                                     <ul class="ft_bottom">    
+
                                     <ul class="ft_bottom">
 
                                         <li><a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris">Home</a></li>
 
                                         <li><a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris">Home</a></li>
−
                                         <li><a href="https://2016.igem.org/At_the_lab.html">At the Lab</a></li>
+
                                         <li><a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris/Working_at_La_Paillasse">in the Lab</a></li>
−
                                         <li><a href="https://2016.igem.org/CelloCad"> Side Projects</a></li>
+
                                         <li><a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris/Measurement"> Side Projects</a></li>
−
                                         <li><a href="Results">Results</a></li>
+
                                         <li><a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris/Parts">Results</a></li>
−
                                         <li><a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris/Human_Practice">Human Practice</a></li>
+
                                         <li><a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris/HPintro">Human
−
                                         <li><a href="https://2016.igem.org/Team.html">Team</a></li>
+
                                            Practice</a></li>
 +
                                         <li><a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris/Team">Team</a></li>
 
                                     </ul>
 
                                     </ul>
 
                                 </nav>
 
                                 </nav>
Line 286: Line 304:
 
                             <div class="col-md-5 fix_p">
 
                             <div class="col-md-5 fix_p">
 
                                 <div class="ft_paragraph">
 
                                 <div class="ft_paragraph">
−
                                     <p>©IONIS_IGEM_2016</a>.</p>  
+
                                     <p>©IONIS_IGEM_2016</a>.</p>
 
                                 </div>
 
                                 </div>
−
                             </div>
+
                             </div>
 
                         </div>
 
                         </div>
 
                     </div>
 
                     </div>
 
                 </div>
 
                 </div>
−
             </div>            
+
             </div>
−
        </footer>
+
    </footer>
−
        <!-- ====END FOOTER AREA==== -->
+
    <!-- ====END FOOTER AREA==== -->
−
     
+
−
        <!-- Nos scripts -->
+
−
<!-- TODO: Debug these scripts
+
−
        <script type="text/javascript" src="https://2016.igem.org/wiki/index.php?title=Template:IONIS_PARIS_JS_Venobox&action=raw&ctype=text/javascript"></script>
+
−
        <script type="text/javascript" src="https://2016.igem.org/wiki/index.php?title=Template:IONIS_PARIS_JS_MDB&action=raw&ctype=text/javascript"></script>
+
−
        <script type="text/javascript" src="https://2016.igem.org/wiki/index.php?title=Template:IONIS_PARIS_JS_Carousel&action=raw&ctype=text/javascript"></script>
+
−
-->
+
−
        <script type="text/javascript" src="https://2016.igem.org/wiki/index.php?title=Template:IONIS_PARIS_JS&action=raw&ctype=text/javascript"></script>
+
  
 +
    <!-- ====Google Maps API==== -->
 +
    <script src="https://maps.googleapis.com/maps/api/js"></script>
 +
 +
    <!-- Nos scripts -->
 +
    <script type="text/javascript" src="https://2016.igem.org/wiki/index.php?title=Template:IONIS_PARIS_JS&action=raw&ctype=text/javascript"></script>
  
−
     
 
 
</html>
 
</html>

Latest revision as of 19:52, 19 October 2016

Protocol 6 : E.Coli Dh5α and BL21 transformation (Heat-shock)

Aim: Introduce plasmid DNA in E.Coli bacteria

Thaw a tube of DH5-alpha competent cells on ice for 10 min.
Mix gently and carefully pipette 50 µL of cells into a transformation tube on ice
Add 1-5µL plasmid DNA to the cell mixture (one tube for each ratio)
Carefully flick the tube 4-5 times to mix cells and DNA. Do not vortex.
Place the mixture on ice for 30 min. Do not mix.
Heat shock at exactly 42°C for 45 s. Do not mix.
Place on ice for 5 min. Do not mix.
Pipette 250µL of room temperature SOC into the mixture.
Place at 37°C for 60 min at 250 rpm.
Warm selection plates to 25°C.
Mix the cells by flicking the tube and inverting.
Spread 100µL of cells onto selection plates.
Incubate all the plates O/N at 37°C.

Sources

  • NEB Transformation Protocol

  • Addgene Bacterial Transformation protocol