Difference between revisions of "Team:Ionis Paris/Protocol 12"

 
(17 intermediate revisions by 5 users not shown)
Line 7: Line 7:
 
         <link href='https://fonts.googleapis.com/css?family=Open+Sans:400,600,700,600italic,400italic,700italic,300,300italic' rel='stylesheet' type='text/css'>
 
         <link href='https://fonts.googleapis.com/css?family=Open+Sans:400,600,700,600italic,400italic,700italic,300,300italic' rel='stylesheet' type='text/css'>
  
−
        <!-- Nos feuilles de style -->
+
  <!-- Nos feuilles de style -->
−
        <link rel="stylesheet" type="text/css" href="https://2016.igem.org/Template:IONIS_Paris-test?action=raw&ctype=text/css" />
+
    <link rel="stylesheet" type="text/css" href="https://2016.igem.org/Template:IONIS_Paris-style-css-template?action=raw&ctype=text/css" />
−
        <link rel="stylesheet" type="text/css" href="https://2016.igem.org/Template:IONIS_Paris-style-css?action=raw&ctype=text/css" />
+
    <link rel="stylesheet" type="text/css" href="https://2016.igem.org/Template:IONIS_Paris-style-css?action=raw&ctype=text/css" />
 
          
 
          
 
        
 
        
Line 18: Line 18:
 
                     <div class="col-sm-12">
 
                     <div class="col-sm-12">
 
                         <div class="banner_title" >
 
                         <div class="banner_title" >
−
                             <h1>Protocol 12</h1>
+
                             <h1 id="back_to_the_top">Protocol 12</h1>
 
                              
 
                              
 
                         </div>
 
                         </div>
Line 48: Line 48:
 
                                  
 
                                  
 
                                       <div class="blog_top">
 
                                       <div class="blog_top">
−
                                 <p><b>Warning: in order to get proper result analysis, it is better to perform 3 replicates for each toluene concentration</b></p>
+
                                 <p><i> 3 replicates for each toluene concentration were realized in order to improve the results statistics </i></p>
 +
<p><b> Every toluene manipulations were performed under a chemical hood and following the safety protocol available <a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris/Labsafety" ><font color="DeepPink"> here </font></a>. Bacterial culture containing toluene were only openned under the chemical hood. Spectrometer tank as well as 96 wells plate were covered with parafilm before proceeded to OD or luciferase activity measurement.</b></p>
 +
 
 
                               <h4 class="blog" style="margin-top:20px">
 
                               <h4 class="blog" style="margin-top:20px">
 
                                     Toluene preparation: stock solutions</h4>
 
                                     Toluene preparation: stock solutions</h4>
−
                                     <p><b><u>100mg/L:</u></b> Dilution of absolute liquid toluene (Cm= 867g/L) to obtain a final toluene concentration at 100mg/L: Add 11,53uL of toluene into 100mL water (calculations done from toluene's molecular weight)<br/><b><u>100µg/L:</u></b> Dilute 10µL of the first stock solution into 10mL of water</p>
+
 
 +
 
 +
                                     <p><b><u>1g/L:</u></b> Dilution of absolute liquid toluene (Cm= 867g/L) to obtain a final toluene concentration at 1g/L: Add 11,53µL of toluene into 10mL ethanol (calculations done from toluene's molecular weight)<br/>
 +
<b><u>100µg/L:</u></b> Dilute 1µL of the first stock solution into 10mL of Ethanol</p>
  
 
                               <h4 class="blog" style="margin-top:20px">
 
                               <h4 class="blog" style="margin-top:20px">
 
                                     Inoculation</h4>
 
                                     Inoculation</h4>
 +
 
                                 <p>From 1 UFC:<br./>
 
                                 <p>From 1 UFC:<br./>
−
Resuspend colony in 20 mL of LB medium containing chloramphenicol at 25µg/mL but free of toluene and grow over night.<br/>
+
Resuspend a colony in 20mL of LB medium containing chloramphenicol at 25µg/mL but free of toluene and grow over night.<br/>
−
When turbidity is high, inoculate the appropriate volume of bacteria culture to liquid LB medium containing chloramphenicol to reach 0,1 OD in the flask (100mL). Incubate culture at 37°C and 250 rpm .<br/>
+
When turbidity is high, inoculate the appropriate volume of bacteria culture to liquid LB medium (100mL) containing chloramphenicol. Mix and separate the bacterial culture into several falcon tubes (10mL in each tube) and add toluene to reach the desired toluene concentration. </p>
−
When the OD reach 0.1, separate the initial bacterial culture to several falcon tubes (5mL in each tube) and add toluene to reach the desired toluene concentration. </p>
+
  
 
<table>
 
<table>
Line 67: Line 72:
 
<td> C1 </td>  
 
<td> C1 </td>  
 
<td> C2 </td>  
 
<td> C2 </td>  
−
<td> </td>
 
−
<td> C3 </td>
 
 
</tr>
 
</tr>
  
 
<tr>
 
<tr>
−
<td> LB (mL) </td>
+
<td> Bacterial culture (mL) </td>
 
<td> 10 </td>  
 
<td> 10 </td>  
 
<td> 10 </td>  
 
<td> 10 </td>  
 
<td> 10 </td>  
 
<td> 10 </td>  
−
<td> LB (mL) </td>
 
−
<td> 10 </td>
 
−
 
 
</tr>
 
</tr>
  
Line 86: Line 86:
 
<td> 0,5 </td>  
 
<td> 0,5 </td>  
 
<td> 50 </td>  
 
<td> 50 </td>  
−
<td> Toluene from stock solution 100mg/L (µL)  </td>
 
−
<td> 0,5 </td>
 
 
</tr>
 
</tr>
  
Line 95: Line 93:
 
<td> 5 </td>  
 
<td> 5 </td>  
 
<td> 500 </td>  
 
<td> 500 </td>  
−
<td> Obtain concentration (mg/L)  </td>
 
−
<td> 5 </td>
 
−
 
 
</tr>
 
</tr>
  
 
</table>
 
</table>
  
 +
<table>
 +
<tr>
 +
<td> </td>
 +
<td> C3 </td>
 +
</tr>
  
 +
<tr>
 +
<td> Bacterial culture (mL) </td>
 +
<td> 10 </td>
 +
</tr>
 +
 +
<tr>
 +
<td> Toluene from stock solution 1g/L (µL)  </td>
 +
<td> 50 </td>
 +
</tr>
 +
 +
<tr>
 +
<td> Obtain concentration (mg/L)  </td>
 +
<td> 5 </td>
 +
</tr>
 +
</table>
  
  
−
                                <figure class="postImg waves-effect">
 
−
                                    <img src="https://static.igem.org/mediawiki/2016/b/b4/T--Ionis_Paris--Protocol12Table1.png" alt="">
 
−
                                </figure>
 
 
                                 <p>Incubate culture at 37°C and 250 rpm.
 
                                 <p>Incubate culture at 37°C and 250 rpm.
 
Regularly measure the OD with a spectrophotometer </p>
 
Regularly measure the OD with a spectrophotometer </p>
  
  
−
                                 <h4 class="blog" style="margin-top:20px">OD measurement over time (at t=0, t=30min, t=1h, t=2h…)</h4>
+
                                 <h4 class="blog" style="margin-top:20px">OD measurement over time </h4>
−
                                <p><b>NB: The blank must be the clean liquid LB medium</b><br/>
+
 
−
<b>NB : Samples must be diluted if OD is too high (>1)</b><br/> 
+
<p> OD measurment were realize every hours until 8 hours after toluene addition <br/>
 +
<i>NB: The blank must be the clean liquid LB medium</i><br/>
 +
<i>NB : Samples must be diluted if OD is too high (>1) </i> <br/> </p>
 +
 
 +
<p>
 
<u>For each culture:</u><br/>
 
<u>For each culture:</u><br/>
 
                                         <li>
 
                                         <li>
−
                                             <p>Pipette 100ul of culture and dilute in 900uL LB medium used for the culture (dilution 1/10)</p>
+
                                             <p>Pipette 500µL of culture and dilute in 500µL LB medium used for the culture (dilution 1/10)</p>
 
                                         </li>
 
                                         </li>
 
                                         <li>
 
                                         <li>
Line 126: Line 142:
 
                                         </li>
 
                                         </li>
 
                                         <li>
 
                                         <li>
−
                                             <p>Multiply OD of samples with dilution factor (10 times here)</p>
+
                                             <p>Multiply OD of samples with dilution factor (2 times here)</p>
 
                                         </li>
 
                                         </li>
 
</p>
 
</p>
Line 234: Line 250:
 
                                     <li>
 
                                     <li>
 
                                         <a href="Protocol 12">
 
                                         <a href="Protocol 12">
−
                                             <span>Protocol 12 : Bacterial growth analysis</span>
+
                                             <span> Protocol 12: Cell Survival assay</span>
 
                                            
 
                                            
 
                                         </a>
 
                                         </a>
Line 297: Line 313:
 
                              
 
                              
 
                                 </ul>
 
                                 </ul>
 +
</aside>
 
                             </div>
 
                             </div>
 
                             <h4 class="sidebar_Hd">Sources</h4>
 
                             <h4 class="sidebar_Hd">Sources</h4>
  
−
               <p><li><a href="https://www.qiagen.com/fr/resources/technologies/plasmid-resource-center/growth%20of%20bacterial%20cultures/#Measuring%20cell%20density">Qiagen protocol for measuring cell density</a></li></p>
+
               <p><li><a href="https://www.qiagen.com/fr/resources/technologies/plasmid-resource-center/growth%20of%20bacterial%20cultures/#Measuring%20cell%20density"><font color="DeepPink">Qiagen protocol for measuring cell density</font></a></li></p>
−
                         </aside>
+
                          
 
                     </div>
 
                     </div>
 
                 </div>
 
                 </div>
 
             </div>
 
             </div>
 +
          </div>
 
         </section>
 
         </section>
 
         <!-- ====END BLOG TABLE==== -->
 
         <!-- ====END BLOG TABLE==== -->
 
          
 
          
−
        <!-- ====START SOCIAL Link==== -->
+
−
        <div class="footer_social">
+
      <!-- ====START SOCIAL Link==== -->
−
            <div class="container-fluid">
+
    <div class="footer_social">
−
                <div class="row">
+
        <div class="container-fluid">
−
                    <ul class="ft_top clearfix">
+
            <div class="row">
−
                        <li class="waves-effect waves-light">
+
                <ul class="ft_top clearfix">
−
                            <a href="#" target="_blank">
+
                    <li class="waves-effect waves-light">
−
                                <i class="zmdi zmdi-facebook "></i>Facebook
+
                        <a href="https://www.facebook.com/ionisigem/?fref=ts" target="_blank">
−
                            </a>
+
                            <i class="zmdi zmdi-facebook "></i>Facebook
−
                        </li>  
+
                        </a>
−
                        <li class="waves-effect waves-light">
+
                    </li>
−
                            <a href="#" target="_blank">
+
                    <li class="waves-effect waves-light">
−
                                <i class="zmdi zmdi-twitter"></i>Twitter
+
                        <a href="https://twitter.com/igem_ionis" target="_blank">
−
                            </a>
+
                            <i class="zmdi zmdi-twitter"></i>Twitter
−
                        </li>  
+
                        </a>
−
                        <li class="waves-effect waves-light">
+
                    </li>
−
                            <a href="#" target="_blank">
+
                    <li class="waves-effect waves-light">
−
                                <i class="zmdi zmdi-flickr"></i>Flickr
+
                        <a href="https://www.youtube.com/channel/UC0RyQsB5YpweSRBYQlAdZDA" target="_blank">
−
                            </a>
+
                            <i class="zmdi zmdi-youtube"></i>youtube
−
                        </li>
+
                        </a>
−
                        <li class="waves-effect waves-light">
+
                    </li>
−
                            <a href="#" target="_blank">
+
                    <li class="waves-effect waves-light">
−
                                <i class="zmdi zmdi-linkedin"></i>LinkedIn
+
                        <a href="https://www.linkedin.com/company/igem-ionis" target="_blank">
−
                            </a>
+
                            <i class="zmdi zmdi-linkedin"></i>LinkedIn
−
                        </li>  
+
                        </a>
−
                        <li class="waves-effect waves-light">
+
                    </li>
−
                            <a href="#" target="_blank">
+
 
−
                                <i class="zmdi zmdi-dribbble"></i>Dribble
+
                 </ul>
−
                            </a>
+
−
                        </li>
+
−
                        <li class="waves-effect waves-light">
+
−
                            <a href="#" target="_blank">
+
−
                                <i class="zmdi zmdi-vimeo"></i>Vimeo
+
−
                            </a>
+
−
                        </li>  
+
−
                    </ul>
+
−
                 </div>
+
 
             </div>
 
             </div>
 
         </div>
 
         </div>
−
        <!-- ====END FOOTER TOP==== -->
+
    </div>
−
       
+
    <!-- ====END FOOTER TOP==== -->
−
        <!-- ====START FOOTER AREA==== -->
+
 
−
        <footer class="footer_area">
+
    <!-- ====START FOOTER AREA==== -->
−
            <div class="footer_middle">
+
    <footer class="footer_area">
−
                <div class="container">
+
        <div class="footer_middle">
−
                    <div class="row">
+
            <div class="container">
−
                        <div class="col-xs-12">
+
                <div class="row">
−
                            <div class="scroll_area">
+
                    <div class="col-xs-12">
 +
                        <div class="scroll_area">
 +
                            <div class="sroll_top">
 +
                                <a href="#ancre"> <i class="zmdi zmdi-chevron-up btn waves-effect"> </i> </a>
 
                             </div>
 
                             </div>
 
                         </div>
 
                         </div>
 
                     </div>
 
                     </div>
 +
                </div>
 +
                <div class="row">
 
                     <div class="row">
 
                     <div class="row">
 
                         <div class="col-lg-5 col-md-5 col-sm-12">
 
                         <div class="col-lg-5 col-md-5 col-sm-12">
 
                             <div class="middle_content">
 
                             <div class="middle_content">
−
                                 <h4>More about us</h4>
+
                                 <h4>iGEM IONIS</h4>
−
                                 <p>If you’ve followed along and done the steps above, you’ve created a good starting place. You’re going to need to make sure your pages are optimized properly. This will ensure you get your page ranked high in the search engines. ou’re going to need to make sure your pages are optimized properly.
+
                                 <p> We're a group of six different schools from the IONIS Education Group. For this
−
            Read More</p>
+
                                    competition we wanted to take advantages of the multiple schools and activity field
−
                              <a href="#">Read More</a>
+
                                    given by the IONIS education group to create a solid project.</p>
 +
                                <a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris/Team">Read More</a>
 
                             </div>
 
                             </div>
 
                         </div>
 
                         </div>
 +
 
                         <div class="col-lg-3 col-lg-offset-1 col-md-4 col-sm-7">
 
                         <div class="col-lg-3 col-lg-offset-1 col-md-4 col-sm-7">
 
                             <div class="footer_Widgets">
 
                             <div class="footer_Widgets">
Line 374: Line 390:
 
                                     <ul>
 
                                     <ul>
 
                                         <li><i class="zmdi zmdi-pin"></i>
 
                                         <li><i class="zmdi zmdi-pin"></i>
−
                                             <span>Location: Lorance Road 542B,5248 MT, Wordwide Country</span>
+
                                             <span>Location: 66 Rue Guy Môquet, 94800 Villejuif, France</span>
−
                                        </li>
+
−
                                        <li><i class="zmdi zmdi-phone"></i>
+
−
                                            <a href="tel:123-456-7890">Phone: 123-456-7890</a>
+
 
                                         </li>
 
                                         </li>
 +
 
                                         <li><i class="zmdi zmdi-email"></i>
 
                                         <li><i class="zmdi zmdi-email"></i>
−
                                             <a href="mailto:contact@domain.com">email: contact@domain.com</a>
+
                                             <a href="mailto:igem.ionis@gmail.com">email: igem.ionis@gmail.com</a>
−
                                        </li>
+
−
                                        <li><i class="zmdi zmdi-globe"></i>
+
−
                                            <a href="#">www.domain.com</a>
+
 
                                         </li>
 
                                         </li>
 +
 
                                     </ul>
 
                                     </ul>
 
                                 </div>
 
                                 </div>
 
                             </div>
 
                             </div>
 
                         </div>
 
                         </div>
−
                        <div class="col-lg-3 col-md-3 col-sm-5">
+
                    <div class="col-lg-3 col-md-3 col-sm-5">
 
                             <div class="footer_Widgets">
 
                             <div class="footer_Widgets">
−
                                 <h4>Galleries</h4>
+
                                 <h4>Download the app</h4>
−
                                 <figure class="widget_gallery">
+
                                 <a href="https://itunes.apple.com/us/app/quantifly/id1166875690?ls=1&mt=8"
−
                                    <div class="RXcircleEffect"></div>
+
                                  target="_blank" style="target-new: tab;">
−
                                    <img src="img/gallery_1.jpg" alt="" />
+
                                    <figure class="widget_gallery">
−
                                    <figcaption>
+
                                        <div class="RXcircleEffect"></div>
−
                                         <a class="veno vbox-item" href="img/gallery_1.jpg" data-gall="group_4">
+
                                        <img src="https://static.igem.org/mediawiki/2016/8/8d/IONIS_IGEM_paris_logo_apple.png"
 +
                                            alt="" />
 +
                                         <figcaption>
 
                                             <i class="zmdi zmdi-link"></i>
 
                                             <i class="zmdi zmdi-link"></i>
−
                                         </a>
+
                                         </figcaption>
−
                                     </figcaption>
+
                                     </figure>
−
                                 </figure>
+
                                 </a>
−
                                 <figure class="widget_gallery">
+
                                 <a href="https://play.google.com/store/apps/details?id=fr.plnech.quantifly&hl=en"
−
                                    <div class="RXcircleEffect"></div>
+
                                  target="_blank" style="target-new: tab;">
−
                                    <img src="img/gallery_2.jpg" alt="" />
+
                                    <figure class="widget_gallery">
−
                                    <figcaption>
+
                                        <div class="RXcircleEffect"></div>
−
                                         <a class="veno vbox-item" href="img/gallery_2.jpg" data-gall="group_4">
+
                                        <img src="https://static.igem.org/mediawiki/2016/6/65/IONIS_IGEM_paris_google_play.png"
 +
                                            alt="" />
 +
                                         <figcaption>
 
                                             <i class="zmdi zmdi-link"></i>
 
                                             <i class="zmdi zmdi-link"></i>
−
                                         </a>
+
                                         </figcaption>
−
                                    </figcaption>
+
                                     </figure>
−
                                </figure>
+
                                 </a>
−
                                <figure class="widget_gallery">
+
 
−
                                     <div class="RXcircleEffect"></div>
+
                       
−
                                    <img src="img/gallery_3.jpg" alt="" />
+
−
                                    <figcaption>
+
−
                                        <a class="veno vbox-item" href="img/gallery_3.jpg" data-gall="group_4">
+
−
                                            <i class="zmdi zmdi-link"></i>
+
−
                                        </a>
+
−
                                    </figcaption>
+
−
                                </figure>
+
−
                                 <figure class="widget_gallery">
+
−
                                    <div class="RXcircleEffect"></div>
+
−
                                    <img src="img/gallery_4.jpg" alt="" />
+
−
                                    <figcaption>
+
−
                                        <a class="veno vbox-item" href="img/gallery_4.jpg" data-gall="group_4">
+
−
                                            <i class="zmdi zmdi-link"></i>
+
−
                                        </a>
+
−
                                    </figcaption>
+
−
                                </figure>
+
−
                                <figure class="widget_gallery">
+
−
                                    <div class="RXcircleEffect"></div>
+
−
                                    <img src="img/gallery_5.jpg" alt="" />
+
−
                                    <figcaption>
+
−
                                        <a class="veno vbox-item" href="img/gallery_5.jpg" data-gall="group_4">
+
−
                                            <i class="zmdi zmdi-link"></i>
+
−
                                        </a>
+
−
                                    </figcaption>
+
−
                                </figure>
+
−
                                <figure class="widget_gallery">
+
−
                                    <div class="RXcircleEffect"></div>
+
−
                                    <img src="img/gallery_6.jpg" alt="" />
+
−
                                    <figcaption>
+
−
                                        <a class="veno vbox-item" href="img/gallery_6.jpg" data-gall="group_4">
+
−
                                            <i class="zmdi zmdi-link"></i>
+
−
                                        </a>
+
−
                                    </figcaption>
+
−
                                </figure>
+
 
                             </div>
 
                             </div>
 
                         </div>  
 
                         </div>  
 +
 
                     </div>
 
                     </div>
 +
 
                 </div>
 
                 </div>
 
             </div>
 
             </div>
Line 457: Line 441:
 
                             <div class="col-md-7 fix_p_l">
 
                             <div class="col-md-7 fix_p_l">
 
                                 <nav>
 
                                 <nav>
−
                                     <ul class="ft_bottom">    
+
                                     <ul class="ft_bottom">
−
                                         <li><a href="#">Home</a></li>
+
                                         <li><a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris">Home</a></li>
−
                                         <li><a href="#">Services</a></li>
+
                                         <li><a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris/Working_at_La_Paillasse">in the Lab</a></li>
−
                                         <li><a href="#"> About </a></li>
+
                                         <li><a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris/Measurement"> Side Projects</a></li>
−
                                         <li><a href="#">Portfolio</a></li>
+
                                         <li><a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris/Parts">Results</a></li>
−
                                         <li><a href="#">Blog </a></li>
+
                                         <li><a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris/HPintro">Human
−
                                         <li><a href="#">Contact US</a></li>
+
                                            Practice</a></li>
 +
                                         <li><a href="https://2016.igem.org/Team:Ionis_Paris/Team">Team</a></li>
 
                                     </ul>
 
                                     </ul>
 
                                 </nav>
 
                                 </nav>
Line 469: Line 454:
 
                             <div class="col-md-5 fix_p">
 
                             <div class="col-md-5 fix_p">
 
                                 <div class="ft_paragraph">
 
                                 <div class="ft_paragraph">
−
                                     <p>©2016 Design by <a href="https://www.behance.net/googoling">Faridul Haque</a> and Develop by <a href="http://themeebit.com">ThemeeBiT</a>.</p>  
+
                                     <p>©IONIS_IGEM_2016</a>.</p>
 
                                 </div>
 
                                 </div>
−
                             </div>
+
                             </div>
 
                         </div>
 
                         </div>
 
                     </div>
 
                     </div>
 
                 </div>
 
                 </div>
−
             </div>            
+
             </div>
−
        </footer>
+
    </footer>
−
        <!-- ====END FOOTER AREA==== -->
+
    <!-- ====END FOOTER AREA==== -->
−
       
+
 
−
     
+
    <!-- ====Google Maps API==== -->
−
        <!-- Nos scripts -->
+
    <script src="https://maps.googleapis.com/maps/api/js"></script>
−
        <script type="text/javascript" src="https://2016.igem.org/wiki/index.php?title=Template:IONIS_PARIS_JS&action=raw&ctype=text/javascript"></script>
+
 
−
     
+
    <!-- Nos scripts -->
 +
    <script type="text/javascript" src="https://2016.igem.org/wiki/index.php?title=Template:IONIS_PARIS_JS&action=raw&ctype=text/javascript"></script>
 +
 
 
</html>
 
</html>

Latest revision as of 19:54, 19 October 2016

Protocol 12: Cell Survival assay

Aim: Assess the impact of toluene on a bacteria population

3 replicates for each toluene concentration were realized in order to improve the results statistics

Every toluene manipulations were performed under a chemical hood and following the safety protocol available here . Bacterial culture containing toluene were only openned under the chemical hood. Spectrometer tank as well as 96 wells plate were covered with parafilm before proceeded to OD or luciferase activity measurement.

Toluene preparation: stock solutions

1g/L: Dilution of absolute liquid toluene (Cm= 867g/L) to obtain a final toluene concentration at 1g/L: Add 11,53µL of toluene into 10mL ethanol (calculations done from toluene's molecular weight)
100µg/L: Dilute 1µL of the first stock solution into 10mL of Ethanol

Inoculation

From 1 UFC: Resuspend a colony in 20mL of LB medium containing chloramphenicol at 25µg/mL but free of toluene and grow over night.
When turbidity is high, inoculate the appropriate volume of bacteria culture to liquid LB medium (100mL) containing chloramphenicol. Mix and separate the bacterial culture into several falcon tubes (10mL in each tube) and add toluene to reach the desired toluene concentration.

C0 Control C1 C2
Bacterial culture (mL) 10 10 10
Toluene from stock solution 100µg/L (µL) 0 0,5 50
Obtain concentration (ng/L) 0 5 500
C3
Bacterial culture (mL) 10
Toluene from stock solution 1g/L (µL) 50
Obtain concentration (mg/L) 5

Incubate culture at 37°C and 250 rpm. Regularly measure the OD with a spectrophotometer

OD measurement over time

OD measurment were realize every hours until 8 hours after toluene addition
NB: The blank must be the clean liquid LB medium
NB : Samples must be diluted if OD is too high (>1)
 

For each culture:

  • Pipette 500µL of culture and dilute in 500µL LB medium used for the culture (dilution 1/10)

  • Make the blank

  • Measure OD

  • Multiply OD of samples with dilution factor (2 times here)

    Sources

  • Qiagen protocol for measuring cell density