Difference between revisions of "Team:ETH Zurich/Experiments"

Line 1: Line 1:
−
{{ETH_Zurich}}
 
−
<html>
 
−
 
 
{{ETH_Zurich}}
 
{{ETH_Zurich}}
  
Line 37: Line 34:
 
<div>
 
<div>
 
<h3>Phusion &#174; High-Fidelity DNA Polymerase</h3>
 
<h3>Phusion &#174; High-Fidelity DNA Polymerase</h3>
−
<p>Components for a 50 &mu;l reaction
+
  <h4>Composition:</h4>
−
       
+
−
 
+
−
 
+
 
         <table frame="void">
 
         <table frame="void">
 
         <tbody>
 
         <tbody>
Line 49: Line 43:
 
              
 
              
 
             <tr>
 
             <tr>
−
                 <td>5X Phusion HF</td>
+
                 <td>Phusion HF Buffer (5x)</td>
 
                  
 
                  
 
                 <td>10 &micro;l</td>
 
                 <td>10 &micro;l</td>
Line 55: Line 49:
 
             </tr>
 
             </tr>
 
             <tr>
 
             <tr>
−
                 <td>10 mM dNTPs</td>
+
                 <td>dNTPs (10 mM)</td>
 
                  
 
                  
 
                 <td>1 &micro;l</td>
 
                 <td>1 &micro;l</td>
Line 61: Line 55:
 
             </tr>
 
             </tr>
 
             <tr>
 
             <tr>
−
                 <td>10 &micro;M Forward Primer</td>
+
                 <td>Forward Primer (10 &micro;M)</td>
 
                  
 
                  
 
                 <td>2.5 &micro;l</td>
 
                 <td>2.5 &micro;l</td>
Line 67: Line 61:
 
             </tr>
 
             </tr>
 
             <tr>
 
             <tr>
−
                 <td>10 &micro;M Reverse Primer</td>
+
                 <td>Reverse Primer (10 &micro;M)</td>
 
                
 
                
 
                 <td>2.5 &micro;l</td>
 
                 <td>2.5 &micro;l</td>
Line 81: Line 75:
 
                 <td>DMSO (optional)</td>
 
                 <td>DMSO (optional)</td>
 
                  
 
                  
−
                 <td>1.5 &micro;l, up to 3%</td>
+
                 <td>up to 3% (1.5 &micro;l)</td>
 
                  
 
                  
 
             </tr>
 
             </tr>
Line 99: Line 93:
 
     </table>
 
     </table>
  
 +
<h4>Thermocycling Conditions:</h4>
 +
<table>
 +
        <tbody>
 +
            <tr>
 +
               
 +
                <td align="center"><strong>Temperatur <br />
 +
                </strong></td>
 +
                <td align="center"><strong>Time<br />
 +
                </strong></td>
 +
            </tr>
 +
            <tr>
 +
             
 +
                <td align="center">98&deg;C </td>
 +
                <td>30 seconds </td>
 +
            </tr>
 +
            <tr>
 +
             
 +
                <td align="center">98&deg;C<br />
 +
                45-72&deg;C<br />
 +
                72&deg;C </td>
 +
                <td>5-10 seconds<br />
 +
                10-30 seconds<br />
 +
                15-30 seconds per kb </td>
 +
            </tr>
 +
            <tr>
 +
             
 +
                <td align="center">72&deg;C </td>
 +
                <td>5-10 minutes </td>
 +
            </tr>
 +
            <tr>
 +
             
 +
                <td align="center">4-10&deg;C </td>
 +
                <td>&nbsp;</td>
 +
            </tr>
 +
        </tbody>
 +
    </table>
  
−
 
−
</p>
 
 
</div>
 
</div>
 
</div>
 
</div>
Line 109: Line 137:
  
  
 +
<div class="sec white">
 +
<div>
 +
<h3>Kap Hifi Hotstart Ready Mix</h3>
 +
 
 +
        <table frame="void">
 +
        <tbody>
 +
            <tr>
 +
                <td><strong>Component</strong></td>
 +
                <td><strong>50 &micro;l Reaction</strong></td>
 +
                </tr>
 +
           
 +
            <tr>
 +
                <td>Phusion HF Buffer (5x)</td>
 +
               
 +
                <td>10 &micro;l</td>
 +
             
 +
            </tr>
 +
            <tr>
 +
                <td>dNTPs (10 mM)</td>
 +
               
 +
                <td>1 &micro;l</td>
 +
             
 +
            </tr>
 +
            <tr>
 +
                <td>Forward Primer (10 &micro;M)</td>
 +
               
 +
                <td>2.5 &micro;l</td>
 +
             
 +
            </tr>
 +
            <tr>
 +
                <td>Reverse Primer (10 &micro;M)</td>
 +
             
 +
                <td>2.5 &micro;l</td>
 +
             
 +
            </tr>
 +
            <tr>
 +
                <td>Template DNA</td>
 +
             
 +
                <td>variable</td>
 +
             
 +
            </tr>
 +
            <tr>
 +
                <td>DMSO (optional)</td>
 +
               
 +
                <td>up to 3% (1.5 &micro;l)</td>
 +
               
 +
            </tr>
 +
            <tr>
 +
                <td>Nuclease-free water</td>
 +
               
 +
                <td>up to 50 &micro;l</td>
 +
               
 +
            </tr>
 +
            <tr>
 +
                <td>Phusion Polymerase</td>
 +
               
 +
                <td>0.5 &micro;l</td>
 +
             
 +
            </tr>
 +
        </tbody>
 +
    </table>
  
 
</div>
 
</div>
 +
</div>
 +
 +
 +
 +
  
−
</html>
+
{{:Template:ETH_Zurich/footer}}

Revision as of 00:32, 9 October 2016

PAVLOV'S COLI

Experimental: Protocols, Methods and Material

Polymerase Chain Reaction

Phusion ® High-Fidelity DNA Polymerase

Composition:

Component 50 µl Reaction
Phusion HF Buffer (5x) 10 µl
dNTPs (10 mM) 1 µl
Forward Primer (10 µM) 2.5 µl
Reverse Primer (10 µM) 2.5 µl
Template DNA variable
DMSO (optional) up to 3% (1.5 µl)
Nuclease-free water up to 50 µl
Phusion Polymerase 0.5 µl

Thermocycling Conditions:

Temperatur
Time
98°C 30 seconds
98°C
45-72°C
72°C 		5-10 seconds
10-30 seconds
15-30 seconds per kb
72°C 5-10 minutes
4-10°C  

Kap Hifi Hotstart Ready Mix

Component 50 µl Reaction
Phusion HF Buffer (5x) 10 µl
dNTPs (10 mM) 1 µl
Forward Primer (10 µM) 2.5 µl
Reverse Primer (10 µM) 2.5 µl
Template DNA variable
DMSO (optional) up to 3% (1.5 µl)
Nuclease-free water up to 50 µl
Phusion Polymerase 0.5 µl
{{:Template:ETH_Zurich/footer}}