Difference between revisions of "Team:Valencia UPV/Notebook"

Revision as of 18:21, 1 October 2016

18May

May 18, 2016

Take glycerinated cultures of C58 Agrobacterium with dsRED from GoldenBraid Collection. Prepare broth culture (5 mL LB + 5 μL kanamycin + 5 μL Rifampin) 1:1000 and incubate overnight at 28^C.

19May

May 19, 2016

Refresh previously made culture by inoculating 10 μL in a new culture medium.

20May

May 20, 2016

Agroinfiltration in Nicotiana benthamiana of C58 with dsRED. href

06Jun

June 06, 2016

Take from the glycerinates of Goldenbraid Collection:

Plasmid	GB Code
pD6B3 α1	GB0015
pD6B3 α2	GB0017
pD6B3 Ω1	GB0019
pD6B3 Ω2	GB0021
pUPD2	GB0307

Prepare liquid culture (3 mL LB + 3 μL antibiotic) 1:1000. Incubate at 37^C overnight.

Experiment with snails:
- Two experiments: one with infiltrated Nicotiana benthamiana and another with not infiltrated N.benthamiana (negative control). Lettuce leafs haven’t been correctly infiltrated and it seems that the expression level is low.
- Let both N. benthamiana leafs with snails overnight at room temperature in separated boxes. We will observe if snails eat the leafs and if appears fluorescence.

15Jun

June 15, 2016

Experiment is over due to snails haven’t eaten leafs enough so we have not been able to see fluorescence.

30Jun

June 30, 2016

Orange Clemenules DNA Genome Extraction protocol

Take from the glycerinates of GoldenBraid Collection:

Plasmid	GB Code
35s:Cas9:nopaline synthase terminator (Tnos)	GB0639
Luciferase (Luc) in pUPD2	GB0096
Tnos in pUPD2	GB0037

01Jul

July 01, 2016

Miniprep of 35s:Cas9:Tnos with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin.
Luciferase and nopaline synthase terminator cultures haven’t succeed. Repeat Luc and Tnos cultures.
Primers IG16JUN01 and IG16JUN02 have arrived.
Finish orange DNA Genome Extraction and check DNA concentration with NanoDrop. Concentration is very low so extraction will be done again.

02Jul

July 02, 2016

Miniprep with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of:
- Luc in pUPD2
- Tnos in pUPD2

Check orange DNA genome concentration with NanoDrop.

Sample	DNA concentration (ng / μL)
TFL 1	3153.8
TFL 2	4527.9

Perform a PCR to bind linker SAGTI with luciferase:

Reagent	Volume(μL)	Program
LuciferasepUPD	1	Temperature	Time
Buffer HF	10	98^C	5 minutes
dNTPs	2	98^C	35x	30 seconds
IG16JUN01	2.5	70^C	35x	30 seconds
IG16JUN02	2.5	72^C	35x	1 minute 30 seconds
Taq phusion	0.5	72^C	10 minutes
H₂O milli-Q	31.5	16^C	∞

04Jul

July 04, 2016

Run electrophoresis gel of Clemenules DNA (agarose 1%). 45 mL agarose gel at 1% 0.45 g of agarose with 45 mL of TAE 1X. Voltage used is 100 V.
Gleva Rice DNA Genome Extraction Protocol
Run electrophoresis gel of Luciferase PCR product. 45 mL agarose gel at 1% 0.45 g of agarose with 45 mL of TAE 1X. Voltage used is 100 V.
Ligation Reaction of SAGTI:Luciferase into a pUPD2.
Transform E. coli DH5α with it. The method that is necessary to carry out this procedure is explained in protocols href
Check DNA concentration with NanoDrop.

SAMPLE	DNA Concentration(ng / μL)
Rice Gleva 1	22.8
Rice Gleva 2	17.3

05Jul

July 05, 2016

Run electrophoresis gel of Gleva rice DNA. We have checked that there isn’t DNA.
Repeat: Rice DNA Genome Extraction Protocol
Check DNA concentration with NanoDrop.

SAMPLE	DNA Concentration(ng / μL)
Rice Gleva 1	294.9
Rice Gleva 2	193.7

Run electrophoresis gel of Gleva rice DNA. It observed that genome extraction is correctly done.

06Jul

July 06, 2016

Take glycerinated cultures from Goldenbraid Collection:

GB part	Plasmid	Antibiotic	Number GB
psgRNA	pUPD	Ampicillin	0645
U6-26	pUPD	Ampicillin	1001

07Jul

July 07, 2016

Miniprep with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of:
- psgRNA in pUPD2
- U6-26 in pUPD2

Primers IG16JUL01, IG16JUL02, IG16JUL03, IG16JUL04, IG16JUL05, IG16JUL06, IG16JUL07 and IG16JUL08 arrived.
gBlocks of - 35s:5’ region - have arrived.
We perform a PCR of Clemenules Orange and Gleva Rice Genome Extraction following the protocol. We want to obtain a fragment of the gene TFL of the orange DNA extraction and the gene Ga20ox of the rice DNA extraction.

Sample	Initial concentration(ng/μL)	Final concentration(ng/μL)	Initial volume(μL)	Final volume (μL)
TFL 1	3153.8	150	4.756	100
TFL 2	4527.9	150	3.31	100
Ga20ox 1	294.9	150	50.8647	100
Ga20ox 2	193.7	150	77.44	100

REAGENT	VOLUME(μL)	PROGRAM
TFL DNA 1	TEMPERATURE	TIME
Buffer HF	10	98^C	5 minutes
dNTPs	2	98^C	35x	30 seconds
IG16JUL01 (TFL_For)	2.5	64^C	35x	30 seconds
IG16JUL02 (TFL_Rev)	2.5	72^C	35x	30 seconds
Taq phusion	0.5	72^C	10 minutes
H₂O milli-Q	31.5	16^C	∞

REAGENT	VOLUME(μL)	PROGRAM
Ga20ox DNA	1	TEMPERATURE	TIME
Buffer HF	10	98^C	5 minutes
dNTPs	2	98^C	35x	30 seconds
IG16JUL03 (Ga20_for)	2.5	72^C	35x	30 seconds
IG16JUL02 (Ga20_rev)	2.5	72^C	35x	30 seconds
Taq phusion	0.5	72^C	10 minutes
H₂O milli-Q	31.5	16^C	∞

Ligate reaction of 35s:5’ region in pUPD2. Following ligation protocol, BsmbI enzyme is used in this reaction.

08Jul

July 08, 2016

Run electrophoresis gel of TFL and Ga20ox PCR products. 45 mL agarose gel at 1 % 0.45 g of agarose with 45 mL of TAE 1X. Voltage used is 120 V.
Transform E. coli with the next part: 35s:5’ region (electroporation 2.5KV). Plating it and incubate overnight at 37^C.
Take glycerinated culture for Georgia collaboration. The part is 35s:GFP:Tnos (α1 and kanamycin).

09Jul

July 09, 2016

Miniprep with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of 35s:GFP:Tnos
No colonies have grown in the 35s:5’ region petri dishes. Repeat transformation procedure, plating again and incubate overnight at 37^C.

11Jul

July 11, 2016

Pick a single E. coli DH5α (35s:5’ region in pUPD2) colony from the plate that has been incubated overnight. Inoculate a starter culture of 4 ml of LB medium with 4 μL of chloramphenicol in a 50 ml tube with the colony and incubate it overnight at 37^C with shaking.
Check Georgia miniprep concentration with NanoDrop (35s:GFP:Tnos)

Sample	DNA Concentration(ng / μL)	DNA Concentration(ng)
1	105.2	5035.2
2	104.6	5035.2

Targets ligations in pUPD2 (Orange TFL and Rice Ga20ox). Following ligation protocol, BsmbI enzyme is used in this reaction.

12Jul

July 12, 2016

Pick a single E. coli DH5α (target Ga20ox in pUPD2 and target TFL in pUPD2) colony from the plate that has been incubated overnight. Inoculate a starter culture of 4 ml of LB medium with 4 μL of chloramphenicol in a 50 ml tube with the colony and incubate it 16 hours at 37^C.
Miniprep with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of 35s:5’region in pUPD2
Digestion of minipreps with NotI. Incubate 1 hour at 37^C
Run electrophoresis gel of the following part: 35s:5’ region in pUPD2. We remain the samples 1 and 3.

Miniprep with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of:
- Ga20ox PCR in pUPD2
- TFL PCR in pUPD2

Digestion of minipreps with NotI. Incubate 1 hour at 37^C.

Run electrophoresis gel of the same part:
- Ga20ox PCR in pUPD2
- TFL PCR in pUPD2

Ligation using Golden Braid assembly of the device 35s:5’region:TFL PCR:Luc:Tnos and 35s:5’region:Ga20oxPCR:Luc:Tnos in α1 plasmid.

13Jul

July 13, 2016

E. coli Transformation with the device 35s:5’region:TFL PCR:Luc:Tnos and 35s:5’region:Ga20oxPCR:Luc:Tnos in α1 plasmid.
E. coli plating in plates with Kanamycin (antibiotic). Incubate overnight at 37^C

14Jul

July 14, 2016

Pick a single E. coli DH5α (35s:5’ region) colony from the plate that has been incubated overnight. Inoculate a starter culture of 4 ml of LB medium with 4 μL of chloramphenicol in a 50 ml tube with the colony and incubate it 16 hours at 37^C.
Primers IG16JUL09, IG16JUL10, IG16JUL11, IG16JUL12, IG16JUL13, IG16JUL14, IG16JUL15 and IG16JUL16 arrived.

Ligation using Golden Braid assembly of the next devices:
- 35s:5’ region:TFL PCR control positive:Luc:Tnos
- 35s:5’ region:Ga20oxPCR control positive:Luc:Tnos
- 35s:5’ region:TFL PCR consensus:Luc:Tnos
- 35s:5’ region:Ga20ox PCR consensus:Luc:Tnos
- U6-26:sgRNA TFL: psgRNA (scaffold)
- U6-26:sgRNA Ga20ox: psgRNA (scaffold)

Step 1: Annealing of oligonucleotides. Received primers are at 1uM. It is necessary taking to 10 uM.
- Mix in an Eppendorf:
- - 8 μL of H₂O milli-Q
  - 1 μL forward primer
  - 1 μL reverse primer
Step 2: Ligation reaction

Reagent	Volume (μL)
TFL target control + / Ga20ox target control + / TFL target consensus / Ga20ox target consensus	1
35s:5’ region	1
Luciferase	1
Tnos	1
α1 plasmid	1
BSA10X	1.2
Ligase Buffer	1.2
BsaI	1
T4 ligase	1
H₂O milli-Q	2.6

Reagent	Volume (μL)
sgRNA TFL / sgRNA Ga20ox	1
U6 -26	1
psgRNA (scaffold)	1
α1 plasmid	1
BSA10X	1.2
Ligase Buffer	1.2
BsaI	1
T4 ligase	1
H₂O milli-Q	3.6

E. coli Transformation with the devices previously explained.
E. coli plating in 6 plates (6 ligation reactions) with Kanamycin (antibiotic). Incubate overnight at 37^C.

Miniprep with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of:
- 35s:5’ region : TFL PCR : Luc : Tnos (3α1)
- 35s:5’ region : Ga20ox PCR : Luc : Tnos (3α1)

Digestion of minipreps with EcoRI. Incubate 1 hour at 37^C

15Jul

July 15, 2016

Ligation using Golden Braid assembly of the next devices:
- 35s:Cas9:Tnos – 35s:5’ region:TFL PCR:Luc:Tnos
- 35s:Cas9:Tnos – 35s:5’ region:Ga20ox PCR:Luc:Tnos

E. coli Transformation with the devices previously explained.

Run an electrophoresis gel of the products from the digestion of minipreps. The devices are:
- 35s:5’ region:TFL PCR:Luc:Tnos (3α1)
- 35s:5’ region :Ga20ox PCR:Luc:Tnos (3α1)

Sequencing 35s:5’region in pUPD2 → correct

16Jul

July 16, 2016

Transformations in E. coli DH5α with:
- 35s:5’ region:TFL PCR:Luc:Tnos (3α1)
- 35s:5’ region:Ga20ox PCR:Luc:Tnos (3α1)

Plating the last devices in 2 plates with Agrobacterium C58. Incubate 2 days at 28^C.

Minipreps (2 samples for each device) with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of:
- 35s:5’ region:TFL target control positive:Luc:Tnos
- 35s:5’ region:Ga20ox target control positive:Luc:Tnos
- 35s:5’ region:TFL target consensus:Luc:Tnos
- 35s:5’ region:Ga20ox target consensus:Luc:Tnos
- U6-26:sgRNA TFL:psgRNA (scaffold)
- U6-26:sgRNA Ga20ox:psgRNA (scaffold)

Ligation using Golden Braid assembly of the next devices:
- 35s:Cas9:Tnos – U6:TFL sgRNA:psgRNA (scaffold) (Ω1)
- 35s:Cas9:Tnos – U6: Ga20ox sgRNA:psgRNA (scaffold) (Ω1)

Reagent	Volume (μL)
Promotor 35s:Cas9 : Tnos	1
U6-26:TFL sgRNA:psgRNA / U6-26:Ga20ox sgRNA:psgRNA	1
3Ω1	1
BSA10X	1.2
Ligase Buffer	1.2
BsmbI	1
T4 ligase	1
H₂O milli-Q	4.6

Digestion of the minipreps with EcoRI which have been done before. Incubate 1 hour at 37^C. There is a total of twelve minipreps. It has been followed the Miniprep {digestion protocol path:https://2016.igem.org/Team:Valencia_UPV/Notebook/Protocol].
Run electrophoresis gel of the digestion products.

Lanes	Samples	Verification
1	1 Kb molecular weight marker	correct
2	gRNA Ga20ox 1	correct
3	gRNA Ga20ox 2	correct
4	Ga20ox consensus 1	correct
5	Ga20ox consensus 2	correct
6	Ga20ox knock-out 1	-
7	Ga20ox knock-out 2	correct
8	TFL consensus 1	-
9	TFL consensus 2	-
10	TFL knock-out 1	correct
11	TFL knock-out 2	correct
12	TFL gRNA 1	correct
13	TFL gRNA 2	correct
14	1 Kb molecular weight marker	correct

Pick a single E. coli DH5α colony from the plates that have been incubated overnight. The devices are:
- 35s:TFL Knock-out:Luc:Tnos (4 samples)
- U6-26:Ga20ox sgRNA:psgRNA (2 samples)

Inoculate a starter culture of 4 ml of LB medium with 4 μL of kanamycin in a 50 ml tube with the colony and incubate it 16 hours at 37^C.

17Jul

July 17, 2016

Transformation in DH5α E. coli with:
- 35s:Cas9:Tnos – U6:TFL sgRNA:psgRNA (scaffold) (Ω1)
- 35s:Cas9:Tnos – U6:Ga20ox sgRNA:psgRNA (scaffold) (Ω1)

Plating E. coli transformations in plates with LB + agar + IPTG + XGal and incubate it overnight at 37^C.

Miniprep with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of:
- U6-26:Ga20ox sgRNA:psgRNA
- 35s:5’ region:TFL Knock-out:Luc:Tnos (3α1)

Digestion of the minipreps with EcoRI which have been done before. Incubate 1 hour at 37^C. There is a total of six minipreps. It has been followed the Miniprep digestion protocol href.
Run an electrophoresis gel of the digestion products.

Lanes	Samples	Verification
1	1 Kb molecular weight marker
2	gRNA Ga20ox 1	correct
3	gRNA Ga20ox 2	correct
4	gRNA Ga20ox 3	correct
5	gRNA Ga20ox 4	correct
6	TFL knock-out 1	correct
7	TFL knock-out 2	correct
8	1 Kb molecular weight marker	correct

However, despite the fact that electrophoresis gel have correctly run, we have decided to repeat the ligation reactions. We have not get the expected results for a gRNA.

Ligation using Golden Braid assembly of the next devices:
- 35s:5’ region:TFL target control positive:Luc:Tnos
- 35s:5’ region:Ga20ox target control positive:Luc:Tnos
- 35s:5’ region:TFL target consensus:Luc:Tnos
- 35s:5’ region:Ga20ox target consensus:Luc:Tnos
- U6-26:sgRNA TFL:psgRNA (scaffold)
- U6-26:sgRNA Ga20ox:psgRNA (scaffold)

Reagent	Volume(μL)	Reagent	Volume(μL)
TFL/Ga20ox gRNA	1	35s:5’region	1
U6-26	1	TFL/Ga20ox consensus TFL/Ga20ox knock-out	1
psgRNA	1	luciferase	1
3α1	1	Tnos	1
BSA10X	1.2	3α1	1
Ligase Buffer	1.2	BSA10X	1.2
BsaI	1	Ligase Buffer	1.2
T4 ligase	1	BsmbI	1
H₂O milli-Q	3.6	T4 ligase	1
H₂O milli-Q	2.6

18Jul

July 18, 2016

Transformation in DH5α E. coli with ligation products (consensus targets and knock-out targets of TFL and Ga20ox as well as their gRNAs)
Plating E. coli transformations in plates with LB + agar + IPTG + XGal and incubate it overnight at 37^C.

Pick a single Agrobacterium C58 colony from the plates that have been incubating since 16/06/2016. The devices are:
- 35s:5’ region:TFL PCR:Luc:Tnos (3α1)
- 35s:5’ region:Ga20ox PCR:Luc:Tnos (3α1)

Incubate it 48 hours at 28^C.

19Jul

July 19, 2016

Pick transformed E. coli colony from the incubated plates. The devices are:
- 35s:5’ region:TFL target control positive:Luc:Tnos
- 35s:5’ region:Ga20ox target control positive:Luc:Tnos
- 35s:5’ region:TFL target consensus:Luc:Tnos
- 35s:5’ region:Ga20ox target consensus:Luc:Tnos
- U6-26: sgRNA TFL:psgRNA (scaffold)
- U6-26: sgRNA Ga20ox:psgRNA (scaffold)

Incubate it overnight at 37^C.

20Jul

July 20, 2016

Miniprep with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of:
- 35s:5’ region:TFL target knock-out:Luc:Tnos
- 35s:5’ region:Ga20ox target control knock-out:Luc:Tnos
- 35s:5’ region:TFL target consensus:Luc:Tnos
- 35s:5’ region:Ga20ox target consensus:Luc:Tnos
- U6-26:sgRNA TFL:psgRNA (scaffold)
- U6-26:sgRNA Ga20ox:psgRNA (scaffold)

Digestion of the minipreps with EcoRI which have been done before. Incubate 1 hour at 37^C. There is a total of six minipreps. It has been followed the Miniprep {digestion protocol path:https://2016.igem.org/Team:Valencia_UPV/Notebook/Protocol].
Run an electrophoresis gel of the digestion products. We will keep the minipreps with “1”.

Lanes	Samples	Verification
1	1 Kb molecular weight marker	correct
2	gRNA TFL 1	correct
3	gRNA TFL 2	correct
4	TFL consensus 1	correct
5	TFL consensus 2	correct
6	TFL knock-out 1	correct
7	TFL knock-out 2	correct
8	1 Kb molecular weight marker	correct
9	gRNA Ga20ox 1	correct
10	gRNA Ga20ox 2	correct
11	Ga20ox consensus 1	correct
12	Ga20ox consensus 2	-
13	Ga20ox knock-out 1	correct
14	Ga20ox knock-out 2	correct
15	1 Kb molecular weight marker	correct

Ligation using Golden Braid assembly of the next devices. Is used the restriction enzyme BsmbI.
- 35s:Cas 9:Tnos – U6-26:TFL sgRNA:psgRNA
- 35s:Cas 9:Tnos – U6-26:Ga20ox sgRNA:psgRNA

21Jul

July 21, 2016

Transformations in E. coli DH5α with:
- 35s:Cas 9:Tnos – U6-26:TFL sgRNA:psgRNA
- 35s:Cas 9:Tnos – U6-26:Ga20ox sgRNA:psgRNA

Incubate 2 hours at 37^C.
Plating E. coli transformation explained before and incubate it at 37^C overnight.
#Agrobacterium C58 transformation with:

#35s:5’ region:TFL target knock-out:Luc:Tnos
35s:5’ region:Ga20ox target control knock-out:Luc:Tnos
35s:5’ region:TFL target consensus:Luc:Tnos
35s:5’ region:Ga20ox target consensus:Luc:Tnos

Incubate 48 hours at 28^C.

22Jul

July 22, 2016

Sequencing reaction:

Reagent	Volume (μL)
Primer in order to sequence	3
Miniprep reaction	5
H₂O milli-Q	6

Sequence	Order
TFL gRNA	210.13.201
Ga20oxgRNA	210.13.202

Ordered the necessary primers to sequence: TFL consensus, TFL knockout, Ga20ox consensus and Ga20ox knockout.
E. coli transformations with 35s:Cas 9:Tnos – U6-26:TFL sgRNA: psgRNA
Plating the last device in plates with Agrobacterium C58. Plates contain spec + IPTG + X-Gal. Incubate 2 days at 28^C.
Pick a single E. coli DH5α (35s:Cas 9:Tnos – U6-26:TFL sgRNA:psgRNA and 35s:Cas 9:Tnos – U6-26:Ga20ox sgRNA:psgRNA) colony from the plates that has been incubated overnight. Inoculate a starter culture of 4 ml of LB medium with 4 μL of spectinomycin in a 50 ml tube with the colony and incubate it overnight at 37^C with shaking.

23Jul

July 23, 2016

#Minipreps (4 samples for each device) with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of:
- #35s:Cas 9:Tnos – U6-26:TFL sgRNA:psgRNA
- 35s:Cas 9:Tnos – U6-26:Ga20ox sgRNA:psgRNA

Digestion of minipreps with BamHI following digestion protocol href. Incubate 1 hour at 37^C.
Run an electrophoresis gel of the digestion products. We will keep the minipreps with the sample number 4 for TFL sgRNA and the sample number 2 for Ga20ox sgRNA.
Pick a single Agrobacterium C58 (35s:Cas 9:Tnos – U6-26:TFL sgRNA:psgRNA and 35s:Cas 9:Tnos – U6-26:Ga20ox sgRNA:psgRNA ) colony from the plates that has been incubated overnight. Inoculate a starter culture of 5 ml of LB medium with 5 μL of spectinomycin and kanamycin in a falcon tube with the colony and incubate it overnight at 28^C with shaking.
#Agrobacterium C58 transformations with:

#35s:Cas 9:Tnos – U6-26:TFL sgRNA:psgRNA
35s:Cas 9:Tnos – U6-26:Ga20ox sgRNA:psgRNA

24Jul

July 24, 2016

#Store the next cultures at -80^C:
- #35s:5’ region in pUPD2 (DH5α) number 1
- - #SAGTI: luciferase in pUPD2 (DH5α) number 2

25Jul

July 25, 2016

Pick a single Agrobacterium C58 (35s:Cas 9:Tnos – U6-26:TFL sgRNA:psgRNA in 3Ω1 and 35s:Cas 9:Tnos – U6-26:Ga20ox sgRNA:psgRNA in 3Ω1 ) colony from the plates that has been incubated overnight. Inoculate a starter culture of 5 ml of LB medium with 5 μL of spectinomycin and kanamycin in a falcon tube with the colony and incubate it overnight at 28^C with shaking.
Incubate it 48 hours at 28^C
- inipreps of Agrobacterium with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of:
- - 5s:5’ region:TFL target control positive:Luc:Tnos
  - 35s:5’ region:Ga20ox target control positive:Luc:Tnos
  - 35s:5’ region:TFL target consensus:Luc:Tnos
  - 35s:5’ region:Ga20ox target consensus:Luc:Tnos
Digestion of minipreps with the restriction enzyme EcoRI. Incubate 1 hour at 37^C.
Run an electrophoresis gel of the digestion products.

Lanes	Samples	Verification
1	1 Kb molecular weight marker	correct
2	Target Ga20ox consensus	correct
3	Target Ga20ox Knock-out	correct
4	Target TFL consensus	correct
5	Target TFL knock-out	correct
6	1 Kb molecular weight marker	correct

26Jul

July 26, 2016

inipreps with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of:
- 5s:5’ region:TFL PCR:Luc:Tnos in 3α1 plasmid from C58 Agrobacterium
- 35s:5’ region:Ga20ox PCR:Luc:Tnos in 3α1 plasmid from C58 Agrobacterium

Digestion of minipreps with the restriction enzyme EcoRI. Incubate 1 hour at 37^C.
Run an electrophoresis gel of the digestion products:

Lanes	Samples	Verification
1	1 Kb molecular weight marker	correct
2	35s:5’ region:PCR Ga20ox :Luc:Tnos	correct
3	35s:5’ region:PCR TFL Clemunules:Luc:Tnos	correct
6	1 Kb molecular weight marker	correct

26Jul

July 26, 2016

equencing products have arrived:
- 6-26:Ga20ox gRNA:psgRNA in α1 - correct
- U6-26:TFL gRNA:psgRNA in α1 - correct

inipreps with E.Z.N.A ®.® Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of:
- 5s:5’ region: Ga20ox PCR : Luc : Tnos in α1
- 35s:5’ region: TFL PCR : Luc : Tnos in α1

Digestion of minipreps with the restriction enzyme EcoRI. Incubate 1 hour at 37^.
Run electrophoresis gel of the digestion products.

27Jul

July 27, 2016

28Jul

July 28, 2016

29Jul

July 29, 2016

01Aug

August 01, 2016

02Aug

August 02, 2016

03Aug

August 03, 2016

04Aug

August 04, 2016

05Aug

August 05, 2016

08Aug

August 08, 2016

09Aug

August 09, 2016

10Aug

August 10, 2016

devices	Volume (μL)
gTS TFL/ Ga20ox- Renilla	1
Cas9 - gRNA	1
3 α 1 plasmid	1.2
Bsa 10x	1.2
Buffer ligase	1
Bsa I	1
T4 ligase	1
H20 milliQ	4.6

Run electrophoresis gel of: 35s: 5’ region: TFL/Ga20oxPCR: Luc: Tnos – 35s: Renilla: Tnos. We keep the Miniprep number 1.
Refresh the cultures of TFL PCR (pUPD2) and Ga20oxPCR (pUPD2) because we suspect that these cultures are the correct ones but we are not sure so we want to check them. The cultures that we use to refresh were made on 12/07/2016. It is important to remember that we need them to assemble the gTS with the new linkers.

Miniprep with E.Z.N.A ®.® Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of TFL / Ga20oxPCR in pUPD2
Digestion of minipreps with NotI. Incubate 1 hour at 37^
Run electrophoresis gel of Miniprep products. We have made a small gel so we have mix 0.45 g of Agarose with 45 mL of TAE 1X. Voltage used is 100V. Both samples are correct.
Pick a single E. coli DH5α (promoter35s: 5’ region: TFL/Ga20oxcons: Tnos - promoter35s: Renilla: Tnos - 35s: Cas9: Tnos - U6: TFL/Ga20oxgRNA: psgRNA) colony from the plate that has been incubated overnight. Inoculate a starter culture of 4 ml of LB medium with 4 μL of chloramphenicol in a 50 ml tube with the colony and incubate it overnight at 37^ with shaking.
We throw out from Golden Braid collection the glycerinate number 1107 (Cas9 - XT1gRNA) and 0549 (35s: TEV: Tnos)
Ligation reaction of 35s: 5’ region: TFL/ Ga20: Tnos - 35s: Renilla: Tnos + 35s: Cas9: Tnos - U6: TFL/Ga20oxgRNA: psgRNA

5	35s:5’:Ga20cons:Luc:Tnos	3α1	KAN
6	35s:5’:Ga20KO:Luc:Tnos	3α1	KAN
7	35s:5’:TFLcons:Luc:Tnos	3α1	KAN
8	35s:5’:TFLKO:Luc:Tnos	3α1	KAN
9	35s:5’:Ga20cons:Luc:Tnos-35s:Ren:Tnos	3Ω2	SPEC
10	35s:5’:Ga20KO:Luc:Tnos-35s:Ren:Tnos	3Ω2	SPEC
11	35s:5’:Ga20PCR:Luc:Tnos-35s:Ren:Tnos	3Ω2	SPEC
12	35s:5’:TFLcons:Luc:Tnos-35s:Ren:Tnos	3Ω2	SPEC
13	35s:5’:TFLKO:Luc:Tnos-35s:Ren:Tnos	3Ω2	SPEC
14	35s:5’:TFLPCR:Luc:Tnos-35s:Ren:Tnos	3Ω2	SPEC
15	U6:Ga20sgRNA:psgRNA	3α1	KAN
16	U6:TFLsgRNA:psgRNA	3α1	KAN
17	35s:Cas9:Tnos-U6:Ga20gRNA:psgRNA	3Ω1	SPEC
18	35s:Cas9:Tnos-U6:TFLgRNA:psgRNA	3Ω1	SPEC
19	Ga20PCR	pUPD2	CAM
20	TFLPCR	pUPD2	CAM

Transform the products of ligation in DH5 α. Incubate it at 37^ during 2 hours.
We store at -80^:

Promoter35s	pNos
TFLKO	Ga20KO
TFLPCRXT1	Ga20PCRXT1
TFLPCROK	Ga20PCROK
TFLconsOK	Ga20consOK

U6:Ga20oxgRNA: psgRNA - 35s: Cas9: Tnos - Miniprep number 2 was empty. We have resuspended it with 40 μL of H20 milliQ and we have checked the DNA concentration with the Nanodrop. The results show us that the DNA concentration in the Eppendorf was 140 ng/ μL so we have used it.
Miniprep with E.Z.N.A ®.® Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of 35s: 5’ region: TFL/Ga20oxPCR: Luc: Tnos – 35s: Renilla: Tnos
Transform in C58 Agrobacterium 35s: Renilla : Tnos (3 α2)
Plating promoter35s: Renilla: Tnos (3α2)
Luciferase assay

devices	Volume (μL)
35s : 5’ region: Ga20/TFL KO: Luc: Tnos - 35s: Renilla: Tnos - 35s: hCas9: Tnos: U6: Ga20/TFL gRNA: psgRNA	1
35s : 5’ region: Ga20/TFL cons: Luc: Tnos - 35s: Renilla: Tnos - 35s: hCas9: Tnos: U6: Ga20/TFL gRNA: psgRNA	1
3 α 1 plasmid	1.2
Bsa 10X	1.2
Buffer ligase	1
Bsa I	1
T4 ligase	1
H20 milliQ	4.6

nfiltration cultures:
5s: Luc: Tnos	Laboratory controls
	Pnos: Luc: Tnos	Laboratory controls
	gTS TFL KO + Cas9 - XT1:XT2	Positive controls
	gTSGa20oxKO + Cas9 - XT1:XT2	Positive controls
	gTS TFL PCR + Cas9 - XT1:XT2	Negative controls
	gTS Ga20oxPCR + Cas9 - XT1:XT2	Negative controls
	gTS TFL PCR + Cas9 - TFLgRNA	Samples
	gTS TFL cons + Cas9 - TFLgRNA	Samples
	gTS Ga20oxPCR + Cas9 - Ga20gRNA	Samples
	gTS Ga20oxcons + Cas9 - Ga20gRNA	Samples


Transplant agroinfiltrated plants (Nicotiana benthamiana)
Pick up 6 disks per each plant in order to carry out the luciferase assay on 09/08
Ligate reaction of:

device	Volume of culture (mL)	Volume of Agroinfiltration solution (mL)
Cas9 - TFL gRNA	0.7	9.3
Cas 9 - Ga20oxgRNA	0.7	9.3
Cas 9 - XT1: XT2	0.59	9.41
TFL KO	0.67	9.33
TFL PCR	0.73	9.27
Ga20oxconsensus	0.71	9.28
Pnos	0.68	9.32
35s : Luc	0.78	9.22
Ga20oxPCR	0.74	9.26
TFL consensus	0.71	9.29
Ga20ox- KO	0.73	9.27

Miniprep with E.Z.N.A ®.® Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of TMV CDS
Transform DH5 α E. coli with the device 35s : 5’ region: PCR PCR: Luc: Tnos - 35s: Renilla: Tnos. After incubating 2 hours, it must be plated.
Refresh C58 Agrobacterium tumefaciens cultures with the aim of infiltrating in N.benthamiana on 05/08.
Pick a single E. coli DH5α (35S : 5’ region: KO/cons target: Luc:Tnos - promoter35s: renilla: Tnos) colony from the plate that has been incubated overnight. Inoculate a starter culture of 4 ml of LB medium with 4 μL of spectinomycin in a 50 ml tube with the colony and incubate it overnight at 37^ with shaking.Sequencing TMV empty vector with the primer D09OCT01 (10 uM). 5μL of Miniprep and 9μL of primer (dilution 1:3). Sequencing code of 210.13.300 and 210.13.301.
Pick a single E. coli DH5α (promoter35s: 5’ region: TFL/Ga20oxPCR: Luc: Tnos - promoter35s: Renilla: Tnos ) colony from the plate that has been incubated overnight. Inoculate a starter culture of 4 ml of LB medium with 4 μL of kanamycin in a 50 ml tube with the colony and incubate it overnight at 37^ with shaking.
iniprep with E.Z.N.A ®.® Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of:
5s: 5’ region: TFL PCR: Luc: Tnos - promoter35s: Renilla: Tnos
	35s: 5’ region: Ga20oxPCR: Luc: Tnos - promoter35s: Renilla: Tnos
	35s: 5’ region: Ga20oxconsensus: Luc: Tnos - promoter35s: Renilla: Tnos
	35s: 5’ region: Ga20oxKO: Luc: Tnos - promoter35s: Renilla: Tnos


Digestion of minipreps with EcoRV. Incubate 1 hour at 37^
Run electrophoresis gel of the digestion products: TFLK01, TFLK02, TFLcons01, TFLcons02, GAK01, GAK02, GAcons01, GAcons02.
Prepare the Agroinfiltration with the correct protocol.
Centrifuge the cultures at 3000 rpm during 15 minutes. We discard the supernatant and it is necessary to resuspend in 5mL of Agroinfiltration solution. Let shaking it a RT during 2 hours. OD’s measurement

Reagent	Volume(μL)
35s:5’region: TFL/Ga20oxPCR: Luc: Tnos	1
Promoter35s: Renilla: Tnos	1
pUPD2	1
BSA10X	1.2
Ligase Buffer	1.2
BsmbI	1
T4 ligase	1
H₂O milli-Q	4.6

Ligate reactions of TFL PCR and Ga20ox PCR with Renilla

1	35S:5’	pUPD2	CAM
2	SAGTI:Luc	pUPD2	CAM
3	35s:5’:TFLPCR:Luc:Tnos	3α1	KAN
4	35s:5’:Ga20PCR:Luc:Tnos	3α1	KAN

H5α E. coli transformation with the devices:
5S : 5’ region : TFL KO : Luc : Tnos - promoter35s: Renilla:Tnos in Ω2
	35S : 5’ region : TFL consensus : Luc : Tnos - promoter35s: Renilla:Tnos in Ω2
	35S : 5’ region : Ga20ox KO : Luc : Tnos - promoter35s: Renilla:Tnos in Ω2
	35S : 5’ region : Ga20ox consensus : Luc : Tnos - promoter35s: Renilla:Tnos in Ω2


E. coli plating in plates with Kanamycin (antibiotic). Incubate 16 hours at 37^
inipreps with E.Z.N.A ®.® Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of:
5s:5’region:TFL PCR:Luc:Tnos in α1
	35s:5’region:Ga20oxPCR: Luc: Tnos in α1


Pick a single E. coli DH5α (TMV CDS) colony from the plate that has been incubated overnight. Inoculate a starter culture of 4 ml of LB medium with 4 μL of kanamycin in a 50 ml tube with the colony and incubate it overnight at 37^ with shaking.
Digestion of minipreps with EcoRI. Incubate 1 hour at 37^
Run electrophoresis gel of the devices. We remain the samples 1.
Store at -80^ the devices of gTS PCR

Reagent	Volume(μL)
TFL KO/Ga20KO/TFL cons / Ga20oxcons	1
Promoter35s: Renilla: Tnos	1
pUPD2	1
BSA10X	1.2
Ligase Buffer	1.2
BsmbI	1
T4 ligase	1
H₂O milli-Q	4.6

iniprep with E.Z.N.A ®.® Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of:
5s: TFL PCR : Luc : Tnos
	35s : Ga20ox PCR : Luc : Tnos


Digestion of minipreps with EcoRI following digestion protocol. Incubate 1 hour at 37^.
Run electrophoresis gel of the digestion products. We will discard this culture because the gel result doesn’t correspond with what we expect.
Agroinfiltration procedure with 9 plants of N.benthamiana following the Agroinfiltration protocol.

Pick up the samples of infiltrated plants. We keep 3 disks per plant in a Eppendorf tube and we take 2 samples of each plant.
Luciferase assay is made following the correct protocol. After analyzing all the data obtained, it seems that the system works but we must optimized it to increase the signal range. In this way, we will be able to distinguish signal from noise.
onclusions luciferase assay:
liminate 5’ region of the device
	Change linker sequence
	Add renilla in luciferase assay
	Change reporter to +1
	Use pLess as control
	Use a Wild Type as control
	Insert devices in cis
	Design a consensus target as longer as the amplified.


Culture refresh of C58 Agrobacterium to infiltrate on Friday.
Pick a single E. coli DH5α (35s:5’region:TFL PCR:Luc:Tnos in α1 and 35s:5’region:Ga20oxPCR: Luc: Tnos in α1) colony from the plate that has been incubated overnight. Inoculate a starter culture of 4 ml of LB medium with 4 μL of kanamycin in a 50 ml tube with the colony and incubate it overnight at 37^ with shaking.
Targets ligations with Renilla reporters.

Device	Order	Sequencing
TFL PCR	210.13.250	SNP in the position 652 of the target. Position 1 of the gRNA. GA
Ga20ox PCR	210.13.253	Same sequence
TFL consensus	210.13.251	Same sequence
TFL KO	210.13.252	Same sequence
Ga20ox Consensus	210.13.254	Same sequence
Ga20ox KO	210.13.255	Same sequence

Received the necessary primers to sequence: TFL consensus, TFL knockout, Ga20ox consensus and Ga20ox knockout.
repare Agrobacterium cultures: Inoculate a starter culture of 5 ml of LB medium with 5 μL of Kanamycin and 5 μL of rifampin in a 50 ml tube with the colony and incubate it 48 hours at 28^ with shaking. The devices are:
5S : 5’Region : TFL consensus : Luc : Tnos
	35S : 5’Region : TFL knockout : Luc : Tnos
	35S : 5’Region :TFL PCR: Luc : Tnos
	35S : 5’Region : Ga20ox consensus : Luc : Tnos
	35S : 5’Region : Ga20ox knockout : Luc : Tnos
	35S : 5’Region :Ga20ox PCR: Luc : Tnos


Sequencing the last devices to check if these are correct.

Refresh Agrobacterium tumefaciens cultures with the aim of infiltrating in N.benthamiana on 29/07
Refresh cultures of the devices 35s: 5’ region: TFL PCR : Luc : Tnos and 35s : 5’ region: Ga20ox PCR : Luc : Tnos in order to prepare the more Miniprep reaction.
Sequencing results have arrived.

Lanes	Samples	Verification
1	1 Kb molecular weight marker
2	TFL PCR
3	Ga20ox PCR

@@ Line 3: / Line 3: @@
 <html>
 <body>
-	<section>
+    <section>
-		<div class="container">
+        <div class="container">
-			<div class="timeline">
+            <div class="timeline">
-				<div class="timeline-hline"></div>
+                <div class="timeline-hline"></div>
-				<div class="blog-post-item">
+                <div class="blog-post-item">
-					<div class="timeline-entry rounded">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
 <span>May</span>
-						<div class="timeline-vline"></div>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
-					</div>
+                    </div>
-					<ul class="blog-post-info list-inline">
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
-						<li><span class="font-lato">May 18, 2016</span></li>
+                        <li><span class="font-lato">May 18, 2016</span></li>
-					</ul>
+                    </ul>
-					<p>Take glycerinated cultures of C58 <i>Agrobacterium</i> with dsRED from
+                    <p>Take glycerinated cultures of C58 <i>Agrobacterium</i>
-					GoldenBraid Collection. Prepare broth culture (5 mL LB + 5 μL kanamycin +
+                    with dsRED from GoldenBraid Collection. Prepare broth
-μL Rifampin) 1:1000 and incubate overnight at 28^C.<br></p>
+                    culture (5 mL LB + 5 μL kanamycin + 5 μL Rifampin) 1:1000
-				</div>
+                    and incubate overnight at 28^C.<br></p>
-				<div class="blog-post-item">
+                </div>
-					<div class="timeline-entry rounded">
+                <div class="blog-post-item">
-<span>May</span>
+                    <div class="timeline-entry rounded">
-						<div class="timeline-vline"></div>
+<span>May</span>
-					</div>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
-					<ul class="blog-post-info list-inline">
+                    </div>
-						<li><span class="font-lato">May 19, 2016</span></li>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
-					</ul>
+                        <li><span class="font-lato">May 19, 2016</span></li>
-					<p>Refresh previously made culture by inoculating 10 μL in a new culture
+                    </ul>
-					medium.<br></p>
+                    <p>Refresh previously made culture by inoculating 10 μL in
-				</div>
+                    a new culture medium.<br></p>
-				<div class="blog-post-item">
+                </div>
-					<div class="timeline-entry rounded">
+                <div class="blog-post-item">
-<span>May</span>
+                    <div class="timeline-entry rounded">
-						<div class="timeline-vline"></div>
+<span>May</span>
-					</div>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
-					<ul class="blog-post-info list-inline">
+                    </div>
-						<li><span class="font-lato">May 20, 2016</span></li>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
-					</ul>
+                        <li><span class="font-lato">May 20, 2016</span></li>
-					<p><a href="#">Agroinfiltration</a> in <i>Nicotiana benthamiana</i> of C58
+                    </ul>
-					with dsRED.<br></p>
+                    <p>Agroinfiltration in <i>Nicotiana benthamiana</i> of C58
-				</div>
+                    with dsRED. href<br></p>
-				<div class="blog-post-item">
+                </div>
-					<div class="timeline-entry rounded">
+                <div class="blog-post-item">
-<span>Jun</span>
+                    <div class="timeline-entry rounded">
-						<div class="timeline-vline"></div>
+<span>Jun</span>
-					</div>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
-					<ul class="blog-post-info list-inline">
+                    </div>
-						<li><span class="font-lato">June 06, 2016</span></li>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
-					</ul>
+                        <li><span class="font-lato">June 06, 2016</span></li>
-					<p></p>
+                    </ul>
-					<ul>
+                    <p></p>
-						<li>Take from the glycerinates of Goldenbraid Collection:</li>
+                    <ul>
-					</ul>
+                        <li>Take from the glycerinates of Goldenbraid
-					<p><br></p>
+                        Collection:</li>
-					<div class="table-responsive" style="width:55%;overflow:inherit">
+                    </ul>
-						<table class="table table-bordered table-striped">
+                    <p></p>
-							<tr>
+                    <div class="table-responsive" style=
-								<th>Plasmid</th>
+                    "width:55%;overflow:inherit">
-								<th>GB Code</th>
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
-							</tr>
+                            <tr>
-							<tr>
+                                <th>Plasmid</th>
-								<td>pD6B3 α1</td>
+                                <th>GB Code</th>
-								<td>GB0015</td>
+                            </tr>
-							</tr>
+                            <tr>
-							<tr>
+                                <td>pD6B3 α1</td>
-								<td>pD6B3 α2</td>
+                                <td>GB0015</td>
-								<td>GB0017</td>
+                            </tr>
-							</tr>
+                            <tr>
-							<tr>
+                                <td>pD6B3 α2</td>
-								<td>pD6B3 Ω1</td>
+                                <td>GB0017</td>
-								<td>GB0019</td>
+                            </tr>
-							</tr>
+                            <tr>
-							<tr>
+                                <td>pD6B3 Ω1</td>
-								<td>pD6B3 Ω2</td>
+                                <td>GB0019</td>
-								<td>GB0021</td>
+                            </tr>
-							</tr>
+                            <tr>
-							<tr>
+                                <td>pD6B3 Ω2</td>
-								<td>pUPD2</td>
+                                <td>GB0021</td>
-								<td>GB0307</td>
+                            </tr>
-							</tr>
+                            <tr>
-						</table>
+                                <td>pUPD2</td>
-					</div>
+                                <td>GB0307</td>
-					<p><br>
+                            </tr>
-					Prepare liquid culture (3 mL LB + 3 μL antibiotic) 1:1000. Incubate at
+                        </table>
-^C overnight.<br>
+                    </div>
-					<br></p>
+                    <p>Prepare liquid culture (3 mL LB + 3 μL antibiotic)
-					<ul>
+:1000. Incubate at 37^C overnight.<br></p>
-						<li>Experiment with snails:</li>
+                    <ul>
-					</ul>
+                        <li>Experiment with snails:</li>
-					<p>Two experiments: one with infiltrated <i>Nicotiana benthamiana</i> and
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
-					another with not infiltrated N.benthamiana (negative control). Lettuce
+                            <ul>
-					leafs haven’t been correctly infiltrated and it seems that the expression
+                                <li>Two experiments: one with infiltrated
-					level is low.<br>
+                                <i>Nicotiana benthamiana</i> and another with
-					Let both <i>N. benthamiana</i> leafs with snails overnight at room
+                                not infiltrated N.benthamiana (negative
-					temperature in separated boxes. We will observe if snails eat the leafs
+                                control). Lettuce leafs haven’t been correctly
-					and if appears fluorescence.<br>
+                                infiltrated and it seems that the expression
-					<br></p>
+                                level is low.</li>
-				</div>
+                                <li>Let both <i>N. benthamiana</i> leafs with
-				<div class="blog-post-item">
+                                snails overnight at room temperature in
-					<div class="timeline-entry rounded">
+                                separated boxes. We will observe if snails eat
-<span>Jun</span>
+                                the leafs and if appears fluorescence.</li>
-						<div class="timeline-vline"></div>
+                            </ul>
-					</div>
+                        </li>
-					<ul class="blog-post-info list-inline">
+                    </ul>
-						<li><span class="font-lato">June 15, 2016</span></li>
+                    <p></p>
-					</ul>
+                </div>
-					<p>Experiment is over due to snails haven’t eaten leafs enough so we have
+                <div class="blog-post-item">
-					not been able to see fluorescence.<br></p>
+                    <div class="timeline-entry rounded">
-				</div>
+<span>Jun</span>
-				<div class="blog-post-item">
+                        <div class="timeline-vline"></div>
-					<div class="timeline-entry rounded">
+                    </div>
-<span>Jun</span>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
-						<div class="timeline-vline"></div>
+                        <li><span class="font-lato">June 15, 2016</span></li>
-					</div>
+                    </ul>
-					<ul class="blog-post-info list-inline">
+                    <p>Experiment is over due to snails haven’t eaten leafs
-						<li><span class="font-lato">June 30, 2016</span></li>
+                    enough so we have not been able to see
-					</ul>
+                    fluorescence.<br></p>
-					<p>Orange DNA Genome Extraction protocol href<br>
+                </div>
-					<br></p>
+                <div class="blog-post-item">
-					<ul>
+                    <div class="timeline-entry rounded">
-						<li>Take from the glycerinates of GoldenBraid Collection:</li>
+<span>Jun</span>
-					</ul>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
-					<p><br></p>
+                    </div>
-					<div class="table-responsive" style="width:55%;overflow:inherit">
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
-						<table class="table table-bordered table-striped">
+                        <li><span class="font-lato">June 30, 2016</span></li>
-							<tr>
+                    </ul>
-								<th>Plasmid</th>
+                    <p>Orange Clemenules DNA Genome Extraction <a href=
-								<th>GB Code</th>
+                    "https://2016.igem.org/Team:Valencia_UPV/Notebook/Protocol">protocol</a><br>
-							</tr>
+                    </p>
-							<tr>
+                    <ul>
-								<th>omoter 35s:Cas9:nopaline synthase terminator (Tnos)</th>
+                        <li>Take from the glycerinates of GoldenBraid
-								<th>GB0639</th>
+                        Collection:</li>
-							</tr>
+                    </ul>
-							<tr>
+                    <p></p>
-								<td>Luciferase (Luc) in pUPD2</td>
+                    <div class="table-responsive" style=
-								<td>GB0096</td>
+                    "width:55%;overflow:inherit">
-							</tr>
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
-							<tr>
+                            <tr>
-								<td>Tnos in pUPD2</td>
+                                <th>Plasmid</th>
-								<td>GB0037</td>
+                                <th>GB Code</th>
-							</tr>
+                            </tr>
-						</table>
+                            <tr>
-					</div>
+                                <td>35s:Cas9:nopaline synthase terminator
-					<p><br></p>
+                                (Tnos)</td>
-				</div>
+                                <td>GB0639</td>
-				<div class="blog-post-item">
+                            </tr>
-					<div class="timeline-entry rounded">
+                            <tr>
-<span>Jul</span>
+                                <td>Luciferase (Luc) in pUPD2</td>
-						<div class="timeline-vline"></div>
+                                <td>GB0096</td>
-					</div>
+                            </tr>
-					<ul class="blog-post-info list-inline">
+                            <tr>
-						<li><span class="font-lato">July 01, 2016</span></li>
+                                <td>Tnos in pUPD2</td>
-					</ul>
+                                <td>GB0037</td>
-					<p>Miniprep with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of:<br>
+                            </tr>
-					Promoter 35s:Cas9 : Tnos<br>
+                        </table>
-					<br></p>
+                    </div>
-					<ul>
+                    <p></p>
-						<li>Luciferase and nopaline synthase terminator cultures haven’t succeed.
+                </div>
-						Repeat Luc and Tnos cultures.</li>
+                <div class="blog-post-item">
-					</ul>
+                    <div class="timeline-entry rounded">
-					<p><br>
+<span>Jul</span>
-					Primers IG16JUN01 and IG16JUN02 have arrived.<br>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
-					<br>
+                    </div>
-					Finish orange DNA Genome Extraction and check DNA concentration with
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
-					NanoDrop. Concentration is very low so extraction will be done again.<br>
+                        <li><span class="font-lato">July 01, 2016</span></li>
-					<br></p>
+                    </ul>
-				</div>
+                    <p>Miniprep of 35s:Cas9:Tnos with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini
-			</div>
+                    Kit I, Q(capless) Spin.<br>
-		</div>
+                    Luciferase and nopaline synthase terminator cultures
-	</section>
+                    haven’t succeed. Repeat Luc and Tnos cultures.<br>
+                    Primers IG16JUN01 and IG16JUN02 have arrived.<br>
+                    Finish orange DNA Genome Extraction and check DNA
+                    concentration with NanoDrop. Concentration is very low so
+                    extraction will be done again.<br></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 02, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>Miniprep with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I,
+                        Q(capless) Spin of:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>Luc in pUPD2</li>
+                                <li>Tnos in pUPD2</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p>Check orange DNA genome concentration with
+                    NanoDrop.<br></p>
+                    <div class="table-responsive" style=
+                    "width:55%;overflow:inherit">
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                            <tr>
+                                <th>Sample</th>
+                                <th>DNA concentration (ng / μL)</th>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>TFL 1</td>
+                                <td>3153.8</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>TFL 2</td>
+                                <td>4527.9</td>
+                            </tr>
+                        </table>
+                    </div>
+                    <p><br>
+                    Perform a PCR to bind linker SAGTI with luciferase:<br></p>
+                    <div class="table-responsive" style=
+                    "width:55%;overflow:inherit">
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                            <tr>
+                                <th>Reagent</th>
+                                <th>Volume(μL)</th>
+                                <th>Program</th>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>LuciferasepUPD</td>
+                                <td>1</td>
+                                <td>Temperature</td>
+                                <td>Time</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Buffer HF</td>
+                                <td>10</td>
+                                <td>98^C</td>
+                                <td>5 minutes</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>dNTPs</td>
+                                <td>2</td>
+                                <td>98^C</td>
+                                <td>35x</td>
+                                <td>30 seconds</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>IG16JUN01</td>
+                                <td>2.5</td>
+                                <td>70^C</td>
+                                <td>35x</td>
+                                <td>30 seconds</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>IG16JUN02</td>
+                                <td>2.5</td>
+                                <td>72^C</td>
+                                <td>35x</td>
+                                <td>1 minute 30 seconds</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Taq phusion</td>
+                                <td>0.5</td>
+                                <td>72^C</td>
+                                <td>10 minutes</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>H<sub>2</sub>O milli-Q</td>
+                                <td>31.5</td>
+                                <td>16^C</td>
+                                <td>∞</td>
+                            </tr>
+                        </table>
+                    </div>
+                    <p></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 04, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p>Run electrophoresis gel of Clemenules DNA (agarose 1%).
+mL agarose gel at 1% 0.45 g of agarose with 45 mL of TAE
+X. Voltage used is 100 V.<br>
+                    Gleva Rice DNA Genome Extraction <a href=
+                    "https://2016.igem.org/Team:Valencia_UPV/Notebook/Protocol">Protocol</a><br>
+                    Run electrophoresis gel of Luciferase PCR product. 45 mL
+                    agarose gel at 1% 0.45 g of agarose with 45 mL of TAE 1X.
+                    Voltage used is 100 V.<br>
+                    Ligation Reaction of SAGTI:Luciferase into a pUPD2.<br>
+                    Transform <i>E. coli</i> DH5α with it. The method that is
+                    necessary to carry out this procedure is explained in
+                    protocols href<br>
+                    Check DNA concentration with NanoDrop.<br></p>
+                    <div class="table-responsive" style=
+                    "width:55%;overflow:inherit">
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                            <tr>
+                                <th>SAMPLE</th>
+                                <th>DNA Concentration(ng / μL)</th>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Rice Gleva 1</td>
+                                <td>22.8</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Rice Gleva 2</td>
+                                <td>17.3</td>
+                            </tr>
+                        </table>
+                    </div>
+                    <p><br></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 05, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p>Run electrophoresis gel of Gleva rice DNA. We have
+                    checked that there isn’t DNA.<br>
+                    Repeat: Rice DNA Genome Extraction <a href=
+                    "https://2016.igem.org/Team:Valencia_UPV/Notebook/Protocol">Protocol</a><br>
+                    Check DNA concentration with NanoDrop.<br></p>
+                    <div class="table-responsive" style=
+                    "width:55%;overflow:inherit">
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                            <tr>
+                                <th>SAMPLE</th>
+                                <th>DNA Concentration(ng / μL)</th>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Rice Gleva 1</td>
+                                <td>294.9</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Rice Gleva 2</td>
+                                <td>193.7</td>
+                            </tr>
+                        </table>
+                    </div>
+                    <p>Run electrophoresis gel of Gleva rice DNA. It observed
+                    that genome extraction is correctly done.<br>
+                    <br></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 06, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p>Take glycerinated cultures from Goldenbraid
+                    Collection:<br></p>
+                    <div class="table-responsive" style=
+                    "width:55%;overflow:inherit">
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                            <tr>
+                                <th>GB part</th>
+                                <th>Plasmid</th>
+                                <th>Antibiotic</th>
+                                <th>Number GB</th>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>psgRNA</td>
+                                <td>pUPD</td>
+                                <td>Ampicillin</td>
+                                <td>0645</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>U6-26</td>
+                                <td>pUPD</td>
+                                <td>Ampicillin</td>
+                                <td>1001</td>
+                            </tr>
+                        </table>
+                    </div>
+                    <p><br></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 07, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>Miniprep with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I,
+                        Q(capless) Spin of:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>psgRNA in pUPD2</li>
+                                <li>U6-26 in pUPD2</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p>Primers IG16JUL01, IG16JUL02, IG16JUL03, IG16JUL04,
+                    IG16JUL05, IG16JUL06, IG16JUL07 and IG16JUL08 arrived.<br>
+                    gBlocks of - 35s:5’ region - have arrived.<br>
+                    We perform a PCR of Clemenules Orange and Gleva Rice Genome
+                    Extraction following the <a href=
+                    "https://2016.igem.org/Team:Valencia_UPV/Notebook/Protocol">protocol</a>.
+                    We want to obtain a fragment of the gene TFL of the orange
+                    DNA extraction and the gene Ga20ox of the rice DNA
+                    extraction.<br></p>
+                    <div class="table-responsive" style=
+                    "width:55%;overflow:inherit">
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                            <tr>
+                                <th>Sample</th>
+                                <th>Initial concentration(ng/μL)</th>
+                                <th>Final concentration(ng/μL)</th>
+                                <th>Initial volume(μL)</th>
+                                <th>Final volume (μL)</th>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>TFL 1</td>
+                                <td>3153.8</td>
+                                <td>150</td>
+                                <td>4.756</td>
+                                <td>100</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>TFL 2</td>
+                                <td>4527.9</td>
+                                <td>150</td>
+                                <td>3.31</td>
+                                <td>100</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Ga20ox 1</td>
+                                <td>294.9</td>
+                                <td>150</td>
+                                <td>50.8647</td>
+                                <td>100</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Ga20ox 2</td>
+                                <td>193.7</td>
+                                <td>150</td>
+                                <td>77.44</td>
+                                <td>100</td>
+                            </tr>
+                        </table>
+                    </div>
+                    <p><br></p>
+                    <div class="table-responsive" style=
+                    "width:55%;overflow:inherit">
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                            <tr>
+                                <th>REAGENT</th>
+                                <th>VOLUME(μL)</th>
+                                <th>PROGRAM</th>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>TFL DNA 1</td>
+                                <td>TEMPERATURE</td>
+                                <td>TIME</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Buffer HF</td>
+                                <td>10</td>
+                                <td>98^C</td>
+                                <td>5 minutes</td>
+                                <td></td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>dNTPs</td>
+                                <td>2</td>
+                                <td>98^C</td>
+                                <td>35x</td>
+                                <td>30 seconds</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>IG16JUL01 (TFL_For)</td>
+                                <td>2.5</td>
+                                <td>64^C</td>
+                                <td>35x</td>
+                                <td>30 seconds</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>IG16JUL02 (TFL_Rev)</td>
+                                <td>2.5</td>
+                                <td>72^C</td>
+                                <td>35x</td>
+                                <td>30 seconds</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Taq phusion</td>
+                                <td>0.5</td>
+                                <td>72^C</td>
+                                <td>10 minutes</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>H<sub>2</sub>O milli-Q</td>
+                                <td>31.5</td>
+                                <td>16^C</td>
+                                <td>∞</td>
+                            </tr>
+                        </table>
+                    </div>
+                    <p><br></p>
+                    <div class="table-responsive" style=
+                    "width:55%;overflow:inherit">
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                            <tr>
+                                <th>REAGENT</th>
+                                <th>VOLUME(μL)</th>
+                                <th>PROGRAM</th>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Ga20ox DNA</td>
+                                <td>1</td>
+                                <td>TEMPERATURE</td>
+                                <td>TIME</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Buffer HF</td>
+                                <td>10</td>
+                                <td>98^C</td>
+                                <td>5 minutes</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>dNTPs</td>
+                                <td>2</td>
+                                <td>98^C</td>
+                                <td>35x</td>
+                                <td>30 seconds</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>IG16JUL03 (Ga20_for)</td>
+                                <td>2.5</td>
+                                <td>72^C</td>
+                                <td>35x</td>
+                                <td>30 seconds</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>IG16JUL02 (Ga20_rev)</td>
+                                <td>2.5</td>
+                                <td>72^C</td>
+                                <td>35x</td>
+                                <td>30 seconds</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Taq phusion</td>
+                                <td>0.5</td>
+                                <td>72^C</td>
+                                <td>10 minutes</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>H<sub>2</sub>O milli-Q</td>
+                                <td>31.5</td>
+                                <td>16^C</td>
+                                <td>∞</td>
+                            </tr>
+                        </table>
+                    </div>
+                    <p>Ligate reaction of 35s:5’ region in pUPD2. Following
+                    <a href=
+                    "https://2016.igem.org/Team:Valencia_UPV/Notebook/Protocol">ligation
+                    protocol</a>, BsmbI enzyme is used in this reaction.<br>
+                    <br></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 08, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p>Run electrophoresis gel of TFL and Ga20ox PCR products.
+mL agarose gel at 1 % 0.45 g of agarose with 45 mL of
+                    TAE 1X. Voltage used is 120 V.<br>
+                    Transform <i>E. coli</i> with the next part: 35s:5’ region
+                    (electroporation 2.5KV). Plating it and incubate overnight
+                    at 37^C.<br>
+                    Take glycerinated culture for Georgia collaboration. The
+                    part is 35s:GFP:Tnos (α1 and kanamycin).<br>
+                    <br></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 09, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p>Miniprep with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless)
+                    Spin of 35s:GFP:Tnos<br>
+                    No colonies have grown in the 35s:5’ region petri dishes.
+                    Repeat transformation procedure, plating again and incubate
+                    overnight at 37^C.<br>
+                    <br></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 11, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p>Pick a single E. coli DH5α (35s:5’ region in pUPD2)
+                    colony from the plate that has been incubated overnight.
+                    Inoculate a starter culture of 4 ml of LB medium with 4 μL
+                    of chloramphenicol in a 50 ml tube with the colony and
+                    incubate it overnight at 37^C with shaking.<br>
+                    Check Georgia miniprep concentration with NanoDrop
+                    (35s:GFP:Tnos)<br></p>
+                    <div class="table-responsive" style=
+                    "width:55%;overflow:inherit">
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                            <tr>
+                                <th>Sample</th>
+                                <th>DNA Concentration(ng / μL)</th>
+                                <th>DNA Concentration(ng)</th>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>1</td>
+                                <td>105.2</td>
+                                <td>5035.2</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>2</td>
+                                <td>104.6</td>
+                                <td>5035.2</td>
+                            </tr>
+                        </table>
+                    </div>
+                    <p>Targets ligations in pUPD2 (Orange TFL and Rice Ga20ox).
+                    Following <a href=
+                    "https://2016.igem.org/Team:Valencia_UPV/Notebook/Protocol">ligation
+                    protocol</a>, BsmbI enzyme is used in this reaction.<br>
+                    <br></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 12, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p>Pick a single E. coli DH5α (target Ga20ox in pUPD2 and
+                    target TFL in pUPD2) colony from the plate that has been
+                    incubated overnight. Inoculate a starter culture of 4 ml of
+                    LB medium with 4 μL of chloramphenicol in a 50 ml tube with
+                    the colony and incubate it 16 hours at 37^C.<br>
+                    Miniprep with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless)
+                    Spin of 35s:5’region in pUPD2<br>
+                    Digestion of minipreps with NotI. Incubate 1 hour at
+^C<br>
+                    Run electrophoresis gel of the following part: 35s:5’
+                    region in pUPD2. We remain the samples 1 and 3.<br></p>
+                    <ul>
+                        <li>Miniprep with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I,
+                        Q(capless) Spin of:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>Ga20ox PCR in pUPD2</li>
+                                <li>TFL PCR in pUPD2</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p>Digestion of minipreps with NotI. Incubate 1 hour at
+^C.<br></p>
+                    <ul>
+                        <li>Run electrophoresis gel of the same part:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>Ga20ox PCR in pUPD2</li>
+                                <li>TFL PCR in pUPD2</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p>Ligation using Golden Braid assembly of the device
+s:5’region:TFL PCR:Luc:Tnos and
+s:5’region:Ga20oxPCR:Luc:Tnos in α1 plasmid.<br></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 13, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p><i>E. coli</i> Transformation with the device
+s:5’region:TFL PCR:Luc:Tnos and
+s:5’region:Ga20oxPCR:Luc:Tnos in α1 plasmid.<br>
+                    E. coli plating in plates with Kanamycin (antibiotic).
+                    Incubate overnight at 37^C<br></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 14, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p>Pick a single E. coli DH5α (35s:5’ region) colony from
+                    the plate that has been incubated overnight. Inoculate a
+                    starter culture of 4 ml of LB medium with 4 μL of
+                    chloramphenicol in a 50 ml tube with the colony and
+                    incubate it 16 hours at 37^C.<br>
+                    Primers IG16JUL09, IG16JUL10, IG16JUL11, IG16JUL12,
+                    IG16JUL13, IG16JUL14, IG16JUL15 and IG16JUL16
+                    arrived.<br></p>
+                    <ul>
+                        <li>Ligation using Golden Braid assembly of the next
+                        devices:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>35s:5’ region:TFL PCR control
+                                positive:Luc:Tnos</li>
+                                <li>35s:5’ region:Ga20oxPCR control
+                                positive:Luc:Tnos</li>
+                                <li>35s:5’ region:TFL PCR
+                                consensus:Luc:Tnos</li>
+                                <li>35s:5’ region:Ga20ox PCR
+                                consensus:Luc:Tnos</li>
+                                <li>U6-26:sgRNA TFL: psgRNA (scaffold)</li>
+                                <li>U6-26:sgRNA Ga20ox: psgRNA (scaffold)</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>Step 1: Annealing of oligonucleotides. Received
+                        primers are at 1uM. It is necessary taking to 10
+                        uM.</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>Mix in an Eppendorf:</li>
+                                <li style="list-style: none; display: inline">
+                                    <ul>
+                                        <li>8 μL of H<sub>2</sub>O milli-Q</li>
+                                        <li>1 μL forward primer</li>
+                                        <li>1 μL reverse primer</li>
+                                    </ul>
+                                </li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                        <li>Step 2: Ligation reaction</li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <div class="table-responsive" style=
+                    "width:55%;overflow:inherit">
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                            <tr>
+                                <th>Reagent</th>
+                                <th>Volume (μL)</th>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>TFL target control + / Ga20ox target
+                                control + / TFL target consensus / Ga20ox
+                                target consensus</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>35s:5’ region</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Luciferase</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Tnos</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>α1 plasmid</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>BSA10X</td>
+                                <td>1.2</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Ligase Buffer</td>
+                                <td>1.2</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>BsaI</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>T4 ligase</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>H<sub>2</sub>O milli-Q</td>
+                                <td>2.6</td>
+                            </tr>
+                        </table>
+                    </div>
+                    <p><br></p>
+                    <div class="table-responsive" style=
+                    "width:55%;overflow:inherit">
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                            <tr>
+                                <th>Reagent</th>
+                                <th>Volume (μL)</th>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>sgRNA TFL / sgRNA Ga20ox</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>U6 -26</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>psgRNA (scaffold)</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>α1 plasmid</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>BSA10X</td>
+                                <td>1.2</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Ligase Buffer</td>
+                                <td>1.2</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>BsaI</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>T4 ligase</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>H<sub>2</sub>O milli-Q</td>
+                                <td>3.6</td>
+                            </tr>
+                        </table>
+                    </div>
+                    <p><br>
+                    <i>E. coli</i> Transformation with the devices previously
+                    explained.<br>
+                    E. coli plating in 6 plates (6 ligation reactions) with
+                    Kanamycin (antibiotic). Incubate overnight at 37^C.<br></p>
+                    <ul>
+                        <li>Miniprep with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I,
+                        Q(capless) Spin of:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>35s:5’ region : TFL PCR : Luc : Tnos
+                                (3α1)</li>
+                                <li>35s:5’ region : Ga20ox PCR : Luc : Tnos
+                                (3α1)</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p>Digestion of minipreps with EcoRI. Incubate 1 hour at
+^C<br></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 15, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>Ligation using Golden Braid assembly of the next
+                        devices:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>35s:Cas9:Tnos – 35s:5’ region:TFL
+                                PCR:Luc:Tnos</li>
+                                <li>35s:Cas9:Tnos – 35s:5’ region:Ga20ox
+                                PCR:Luc:Tnos</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p>E. coli Transformation with the devices previously
+                    explained.<br></p>
+                    <ul>
+                        <li>Run an electrophoresis gel of the products from the
+                        digestion of minipreps. The devices are:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>35s:5’ region:TFL PCR:Luc:Tnos (3α1)</li>
+                                <li>35s:5’ region :Ga20ox PCR:Luc:Tnos
+                                (3α1)</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p>Sequencing 35s:5’region in pUPD2 → correct<br>
+                    <br></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 16, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>Transformations in <i>E. coli</i> DH5α with:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>35s:5’ region:TFL PCR:Luc:Tnos (3α1)</li>
+                                <li>35s:5’ region:Ga20ox PCR:Luc:Tnos
+                                (3α1)</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p>Plating the last devices in 2 plates with
+                    <i>Agrobacterium</i> C58. Incubate 2 days at 28^C.<br></p>
+                    <ul>
+                        <li>Minipreps (2 samples for each device) with E.Z.N.A
+                        ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>35s:5’ region:TFL target control
+                                positive:Luc:Tnos</li>
+                                <li>35s:5’ region:Ga20ox target control
+                                positive:Luc:Tnos</li>
+                                <li>35s:5’ region:TFL target
+                                consensus:Luc:Tnos</li>
+                                <li>35s:5’ region:Ga20ox target
+                                consensus:Luc:Tnos</li>
+                                <li>U6-26:sgRNA TFL:psgRNA (scaffold)</li>
+                                <li>U6-26:sgRNA Ga20ox:psgRNA (scaffold)</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>Ligation using Golden Braid assembly of the next
+                        devices:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>35s:Cas9:Tnos – U6:TFL sgRNA:psgRNA
+                                (scaffold) (Ω1)</li>
+                                <li>35s:Cas9:Tnos – U6: Ga20ox sgRNA:psgRNA
+                                (scaffold) (Ω1)</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <div class="table-responsive" style=
+                    "width:55%;overflow:inherit">
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                            <tr>
+                                <th>Reagent</th>
+                                <th>Volume (μL)</th>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Promotor 35s:Cas9 : Tnos</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>U6-26:TFL sgRNA:psgRNA / U6-26:Ga20ox
+                                sgRNA:psgRNA</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>3Ω1</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>BSA10X</td>
+                                <td>1.2</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Ligase Buffer</td>
+                                <td>1.2</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>BsmbI</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>T4 ligase</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>H<sub>2</sub>O milli-Q</td>
+                                <td>4.6</td>
+                            </tr>
+                        </table>
+                    </div>
+                    <p>Digestion of the minipreps with EcoRI which have been
+                    done before. Incubate 1 hour at 37^C. There is a total of
+                    twelve minipreps. It has been followed the Miniprep
+                    {digestion protocol
+                    path:https://2016.igem.org/Team:Valencia_UPV/Notebook/Protocol].<br>
+                    Run electrophoresis gel of the digestion products.<br></p>
+                    <div class="table-responsive" style=
+                    "width:55%;overflow:inherit">
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                            <tr>
+                                <th>Lanes</th>
+                                <th>Samples</th>
+                                <th>Verification</th>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>1</td>
+                                <td>1 Kb molecular weight marker</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>2</td>
+                                <td>gRNA Ga20ox 1</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>3</td>
+                                <td>gRNA Ga20ox 2</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>4</td>
+                                <td>Ga20ox consensus 1</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>5</td>
+                                <td>Ga20ox consensus 2</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>6</td>
+                                <td>Ga20ox knock-out 1</td>
+                                <td>-</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>7</td>
+                                <td>Ga20ox knock-out 2</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>8</td>
+                                <td>TFL consensus 1</td>
+                                <td>-</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>9</td>
+                                <td>TFL consensus 2</td>
+                                <td>-</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>10</td>
+                                <td>TFL knock-out 1</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>11</td>
+                                <td>TFL knock-out 2</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>12</td>
+                                <td>TFL gRNA 1</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>13</td>
+                                <td>TFL gRNA 2</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>14</td>
+                                <td>1 Kb molecular weight marker</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                        </table>
+                    </div>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>Pick a single E. coli DH5α colony from the plates
+                        that have been incubated overnight. The devices
+                        are:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>35s:TFL Knock-out:Luc:Tnos (4 samples)</li>
+                                <li>U6-26:Ga20ox sgRNA:psgRNA (2 samples)</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p>Inoculate a starter culture of 4 ml of LB medium with 4
+                    μL of kanamycin in a 50 ml tube with the colony and
+                    incubate it 16 hours at 37^C.<br></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 17, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>Transformation in DH5α <i>E. coli</i> with:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>35s:Cas9:Tnos – U6:TFL sgRNA:psgRNA
+                                (scaffold) (Ω1)</li>
+                                <li>35s:Cas9:Tnos – U6:Ga20ox sgRNA:psgRNA
+                                (scaffold) (Ω1)</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p>Plating <i>E. coli</i> transformations in plates with LB
+                    + agar + IPTG + XGal and incubate it overnight at
+^C.<br></p>
+                    <ul>
+                        <li>Miniprep with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I,
+                        Q(capless) Spin of:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>U6-26:Ga20ox sgRNA:psgRNA</li>
+                                <li>35s:5’ region:TFL Knock-out:Luc:Tnos
+                                (3α1)</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p>Digestion of the minipreps with EcoRI which have been
+                    done before. Incubate 1 hour at 37^C. There is a total of
+                    six minipreps. It has been followed the Miniprep digestion
+                    protocol href.<br>
+                    Run an electrophoresis gel of the digestion
+                    products.<br></p>
+                    <div class="table-responsive" style=
+                    "width:55%;overflow:inherit">
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                            <tr>
+                                <th>Lanes</th>
+                                <th>Samples</th>
+                                <th>Verification</th>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>1</td>
+                                <td>1 Kb molecular weight marker</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>2</td>
+                                <td>gRNA Ga20ox 1</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>3</td>
+                                <td>gRNA Ga20ox 2</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>4</td>
+                                <td>gRNA Ga20ox 3</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>5</td>
+                                <td>gRNA Ga20ox 4</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>6</td>
+                                <td>TFL knock-out 1</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>7</td>
+                                <td>TFL knock-out 2</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>8</td>
+                                <td>1 Kb molecular weight marker</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                        </table>
+                    </div>
+                    <p>However, despite the fact that electrophoresis gel have
+                    correctly run, we have decided to repeat the ligation
+                    reactions. We have not get the expected results for a
+                    gRNA.<br></p>
+                    <ul>
+                        <li>Ligation using Golden Braid assembly of the next
+                        devices:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>35s:5’ region:TFL target control
+                                positive:Luc:Tnos</li>
+                                <li>35s:5’ region:Ga20ox target control
+                                positive:Luc:Tnos</li>
+                                <li>35s:5’ region:TFL target
+                                consensus:Luc:Tnos</li>
+                                <li>35s:5’ region:Ga20ox target
+                                consensus:Luc:Tnos</li>
+                                <li>U6-26:sgRNA TFL:psgRNA (scaffold)</li>
+                                <li>U6-26:sgRNA Ga20ox:psgRNA (scaffold)</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <div class="table-responsive" style=
+                    "width:55%;overflow:inherit">
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                            <tr>
+                                <th>Reagent</th>
+                                <th>Volume(μL)</th>
+                                <th>Reagent</th>
+                                <th>Volume(μL)</th>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>TFL/Ga20ox gRNA</td>
+                                <td>1</td>
+                                <td>35s:5’region</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>U6-26</td>
+                                <td>1</td>
+                                <td>TFL/Ga20ox consensus TFL/Ga20ox
+                                knock-out</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>psgRNA</td>
+                                <td>1</td>
+                                <td>luciferase</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>3α1</td>
+                                <td>1</td>
+                                <td>Tnos</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>BSA10X</td>
+                                <td>1.2</td>
+                                <td>3α1</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Ligase Buffer</td>
+                                <td>1.2</td>
+                                <td>BSA10X</td>
+                                <td>1.2</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>BsaI</td>
+                                <td>1</td>
+                                <td>Ligase Buffer</td>
+                                <td>1.2</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>T4 ligase</td>
+                                <td>1</td>
+                                <td>BsmbI</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>H<sub>2</sub>O milli-Q</td>
+                                <td>3.6</td>
+                                <td>T4 ligase</td>
+                                <td>1</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>H<sub>2</sub>O milli-Q</td>
+                                <td>2.6</td>
+                            </tr>
+                        </table>
+                    </div>
+                    <p><br></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 18, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p>Transformation in DH5α <i>E. coli</i> with ligation
+                    products (consensus targets and knock-out targets of TFL
+                    and Ga20ox as well as their gRNAs)<br>
+                    Plating <i>E. coli</i> transformations in plates with LB +
+                    agar + IPTG + XGal and incubate it overnight at
+^C.<br></p>
+                    <ul>
+                        <li>Pick a single <i>Agrobacterium</i> C58 colony from
+                        the plates that have been incubating since 16/06/2016.
+                        The devices are:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>35s:5’ region:TFL PCR:Luc:Tnos (3α1)</li>
+                                <li>35s:5’ region:Ga20ox PCR:Luc:Tnos
+                                (3α1)</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p>Incubate it 48 hours at 28^C.<br></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 19, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>Pick transformed <i>E. coli</i> colony from the
+                        incubated plates. The devices are:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>35s:5’ region:TFL target control
+                                positive:Luc:Tnos</li>
+                                <li>35s:5’ region:Ga20ox target control
+                                positive:Luc:Tnos</li>
+                                <li>35s:5’ region:TFL target
+                                consensus:Luc:Tnos</li>
+                                <li>35s:5’ region:Ga20ox target
+                                consensus:Luc:Tnos</li>
+                                <li>U6-26: sgRNA TFL:psgRNA (scaffold)</li>
+                                <li>U6-26: sgRNA Ga20ox:psgRNA (scaffold)</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p>Incubate it overnight at 37^C.<br></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 20, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>Miniprep with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I,
+                        Q(capless) Spin of:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>35s:5’ region:TFL target
+                                knock-out:Luc:Tnos</li>
+                                <li>35s:5’ region:Ga20ox target control
+                                knock-out:Luc:Tnos</li>
+                                <li>35s:5’ region:TFL target
+                                consensus:Luc:Tnos</li>
+                                <li>35s:5’ region:Ga20ox target
+                                consensus:Luc:Tnos</li>
+                                <li>U6-26:sgRNA TFL:psgRNA (scaffold)</li>
+                                <li>U6-26:sgRNA Ga20ox:psgRNA (scaffold)</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p>Digestion of the minipreps with EcoRI which have been
+                    done before. Incubate 1 hour at 37^C. There is a total of
+                    six minipreps. It has been followed the Miniprep {digestion
+                    protocol
+                    path:https://2016.igem.org/Team:Valencia_UPV/Notebook/Protocol].<br>
+                    Run an electrophoresis gel of the digestion products. We
+                    will keep the minipreps with “1”.<br></p>
+                    <div class="table-responsive" style=
+                    "width:55%;overflow:inherit">
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                            <tr>
+                                <th>Lanes</th>
+                                <th>Samples</th>
+                                <th>Verification</th>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>1</td>
+                                <td>1 Kb molecular weight marker</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>2</td>
+                                <td>gRNA TFL 1</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>3</td>
+                                <td>gRNA TFL 2</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>4</td>
+                                <td>TFL consensus 1</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>5</td>
+                                <td>TFL consensus 2</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>6</td>
+                                <td>TFL knock-out 1</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>7</td>
+                                <td>TFL knock-out 2</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>8</td>
+                                <td>1 Kb molecular weight marker</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>9</td>
+                                <td>gRNA Ga20ox 1</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>10</td>
+                                <td>gRNA Ga20ox 2</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>11</td>
+                                <td>Ga20ox consensus 1</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>12</td>
+                                <td>Ga20ox consensus 2</td>
+                                <td>-</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>13</td>
+                                <td>Ga20ox knock-out 1</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>14</td>
+                                <td>Ga20ox knock-out 2</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>15</td>
+                                <td>1 Kb molecular weight marker</td>
+                                <td>correct</td>
+                            </tr>
+                        </table>
+                    </div>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>Ligation using Golden Braid assembly of the next
+                        devices. Is used the restriction enzyme BsmbI.</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>35s:Cas 9:Tnos – U6-26:TFL
+                                sgRNA:psgRNA</li>
+                                <li>35s:Cas 9:Tnos – U6-26:Ga20ox
+                                sgRNA:psgRNA</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 21, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>Transformations in <i>E. coli</i> DH5α with:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>35s:Cas 9:Tnos – U6-26:TFL
+                                sgRNA:psgRNA</li>
+                                <li>35s:Cas 9:Tnos – U6-26:Ga20ox
+                                sgRNA:psgRNA</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p>Incubate 2 hours at 37^C.<br>
+                    Plating <i>E. coli</i> transformation explained before and
+                    incubate it at 37^C overnight.<br>
+                    #<i>Agrobacterium</i> C58 transformation with:<br></p>
+                    <ul>
+                        <li>#35s:5’ region:TFL target knock-out:Luc:Tnos</li>
+                        <li>35s:5’ region:Ga20ox target control
+                        knock-out:Luc:Tnos</li>
+                        <li>35s:5’ region:TFL target consensus:Luc:Tnos</li>
+                        <li>35s:5’ region:Ga20ox target consensus:Luc:Tnos</li>
+                    </ul>
+                    <p>Incubate 48 hours at 28^C.<br>
+                    <br></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 22, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p>Sequencing reaction:<br></p>
+                    <div class="table-responsive" style=
+                    "width:55%;overflow:inherit">
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                            <tr>
+                                <th>Reagent</th>
+                                <th>Volume (μL)</th>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Primer in order to sequence</td>
+                                <td>3</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Miniprep reaction</td>
+                                <td>5</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>H<sub>2</sub>O milli-Q</td>
+                                <td>6</td>
+                            </tr>
+                        </table>
+                    </div>
+                    <p><br></p>
+                    <div class="table-responsive" style=
+                    "width:55%;overflow:inherit">
+                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                            <tr>
+                                <th>Sequence</th>
+                                <th>Order</th>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>TFL gRNA</td>
+                                <td>210.13.201</td>
+                            </tr>
+                            <tr>
+                                <td>Ga20oxgRNA</td>
+                                <td>210.13.202</td>
+                            </tr>
+                        </table>
+                    </div>
+                    <p>Ordered the necessary primers to sequence: TFL
+                    consensus, TFL knockout, Ga20ox consensus and Ga20ox
+                    knockout.<br>
+                    <i>E. coli</i> transformations with 35s:Cas 9:Tnos –
+                    U6-26:TFL sgRNA: psgRNA<br>
+                    Plating the last device in plates with <i>Agrobacterium</i>
+                    C58. Plates contain spec + IPTG + X-Gal. Incubate 2 days at
+^C.<br>
+                    Pick a single <i>E. coli</i> DH5α (35s:Cas 9:Tnos –
+                    U6-26:TFL sgRNA:psgRNA and 35s:Cas 9:Tnos – U6-26:Ga20ox
+                    sgRNA:psgRNA) colony from the plates that has been
+                    incubated overnight. Inoculate a starter culture of 4 ml of
+                    LB medium with 4 μL of spectinomycin in a 50 ml tube with
+                    the colony and incubate it overnight at 37^C with
+                    shaking.<br>
+                    <br></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 23, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>#Minipreps (4 samples for each device) with E.Z.N.A
+                        ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin of:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>#35s:Cas 9:Tnos – U6-26:TFL
+                                sgRNA:psgRNA</li>
+                                <li>35s:Cas 9:Tnos – U6-26:Ga20ox
+                                sgRNA:psgRNA</li>
+                            </ul>
+                            <p></p>
+                        </li>
+                    </ul>Digestion of minipreps with BamHI following digestion
+                    protocol href. Incubate 1 hour at 37^C.<br>
+                    Run an electrophoresis gel of the digestion products. We
+                    will keep the minipreps with the sample number 4 for TFL
+                    sgRNA and the sample number 2 for Ga20ox sgRNA.<br>
+                    Pick a single <i>Agrobacterium</i> C58 (35s:Cas 9:Tnos –
+                    U6-26:TFL sgRNA:psgRNA and 35s:Cas 9:Tnos – U6-26:Ga20ox
+                    sgRNA:psgRNA ) colony from the plates that has been
+                    incubated overnight. Inoculate a starter culture of 5 ml of
+                    LB medium with 5 μL of spectinomycin and kanamycin in a
+                    falcon tube with the colony and incubate it overnight at
+^C with shaking.<br>
+                    #<i>Agrobacterium</i> C58 transformations with:<br>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>#35s:Cas 9:Tnos – U6-26:TFL sgRNA:psgRNA</li>
+                        <li style="list-style: none">35s:Cas 9:Tnos –
+                        U6-26:Ga20ox sgRNA:psgRNA<br></li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 24, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>#Store the next cultures at -80^C:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>#35s:5’ region in pUPD2 (DH5α) number
+</li>
+                                <li style="list-style: none; display: inline">
+                                    <ul>
+                                        <li>#SAGTI: luciferase in pUPD2 (DH5α)
+                                        number 2</li>
+                                    </ul>
+                                </li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 25, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>Pick a single <i>Agrobacterium</i> C58 (35s:Cas
+:Tnos – U6-26:TFL sgRNA:psgRNA in 3Ω1 and 35s:Cas
+:Tnos – U6-26:Ga20ox sgRNA:psgRNA in 3Ω1 ) colony from
+                        the plates that has been incubated overnight. Inoculate
+                        a starter culture of 5 ml of LB medium with 5 μL of
+                        spectinomycin and kanamycin in a falcon tube with the
+                        colony and incubate it overnight at 28^C with
+                        shaking.</li>
+                        <li>Incubate it 48 hours at 28^C</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>inipreps of <i>Agrobacterium</i> with
+                                E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin
+                                of:</li>
+                                <li style="list-style: none; display: inline">
+                                    <ul>
+                                        <li>5s:5’ region:TFL target control
+                                        positive:Luc:Tnos</li>
+                                        <li>35s:5’ region:Ga20ox target control
+                                        positive:Luc:Tnos</li>
+                                        <li>35s:5’ region:TFL target
+                                        consensus:Luc:Tnos</li>
+                                        <li>35s:5’ region:Ga20ox target
+                                        consensus:Luc:Tnos</li>
+                                    </ul>
+                                </li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                        <li>Digestion of minipreps with the restriction enzyme
+                        EcoRI. Incubate 1 hour at 37^C.</li>
+                        <li>Run an electrophoresis gel of the digestion
+                        products.</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <div class="table-responsive" style=
+                            "width:55%;overflow:inherit">
+                                <table class=
+                                "table table-bordered table-striped">
+                                    <tr>
+                                        <th>
+                                            <ul>
+                                                <li>Lanes</li>
+                                            </ul>
+                                        </th>
+                                        <th>Samples</th>
+                                        <th>Verification</th>
+                                    </tr>
+                                    <tr>
+                                        <td>
+                                            <ul>
+                                                <li>1</li>
+                                            </ul>
+                                        </td>
+                                        <td>1 Kb molecular weight marker</td>
+                                        <td>correct</td>
+                                    </tr>
+                                    <tr>
+                                        <td>
+                                            <ul>
+                                                <li>2</li>
+                                            </ul>
+                                        </td>
+                                        <td>Target Ga20ox consensus</td>
+                                        <td>correct</td>
+                                    </tr>
+                                    <tr>
+                                        <td>
+                                            <ul>
+                                                <li>3</li>
+                                            </ul>
+                                        </td>
+                                        <td>Target Ga20ox Knock-out</td>
+                                        <td>correct</td>
+                                    </tr>
+                                    <tr>
+                                        <td>
+                                            <ul>
+                                                <li>4</li>
+                                            </ul>
+                                        </td>
+                                        <td>Target TFL consensus</td>
+                                        <td>correct</td>
+                                    </tr>
+                                    <tr>
+                                        <td>
+                                            <ul>
+                                                <li>5</li>
+                                            </ul>
+                                        </td>
+                                        <td>Target TFL knock-out</td>
+                                        <td>correct</td>
+                                    </tr>
+                                    <tr>
+                                        <td>
+                                            <ul>
+                                                <li>6</li>
+                                            </ul>
+                                        </td>
+                                        <td>1 Kb molecular weight marker</td>
+                                        <td>correct</td>
+                                    </tr>
+                                </table>
+                            </div>
+                            <p></p>
+                        </li>
+                        <li></li>
+                    </ul>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 26, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>inipreps with E.Z.N.A ®. Plasmid Mini Kit I,
+                        Q(capless) Spin of:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>5s:5’ region:TFL PCR:Luc:Tnos in 3α1
+                                plasmid from C58 <i>Agrobacterium</i></li>
+                                <li>35s:5’ region:Ga20ox PCR:Luc:Tnos in 3α1
+                                plasmid from C58 <i>Agrobacterium</i></li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <ul>
+                        <li>Digestion of minipreps with the restriction enzyme
+                        EcoRI. Incubate 1 hour at 37^C.</li>
+                        <li>Run an electrophoresis gel of the digestion
+                        products:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <div class="table-responsive" style=
+                            "width:55%;overflow:inherit">
+                                <table class=
+                                "table table-bordered table-striped">
+                                    <tr>
+                                        <th>
+                                            <ul>
+                                                <li>Lanes</li>
+                                            </ul>
+                                        </th>
+                                        <th>Samples</th>
+                                        <th>Verification</th>
+                                    </tr>
+                                    <tr>
+                                        <td>
+                                            <ul>
+                                                <li>1</li>
+                                            </ul>
+                                        </td>
+                                        <td>1 Kb molecular weight marker</td>
+                                        <td>correct</td>
+                                        <td></td>
+                                    </tr>
+                                    <tr>
+                                        <td>
+                                            <ul>
+                                                <li>2</li>
+                                            </ul>
+                                        </td>
+                                        <td>35s:5’ region:PCR Ga20ox
+                                        :Luc:Tnos</td>
+                                        <td>correct</td>
+                                    </tr>
+                                    <tr>
+                                        <td>
+                                            <ul>
+                                                <li>3</li>
+                                            </ul>
+                                        </td>
+                                        <td>35s:5’ region:PCR TFL
+                                        Clemunules:Luc:Tnos</td>
+                                        <td>correct</td>
+                                    </tr>
+                                    <tr>
+                                        <td>
+                                            <ul>
+                                                <li>6</li>
+                                            </ul>
+                                        </td>
+                                        <td>1 Kb molecular weight marker</td>
+                                        <td>correct</td>
+                                        <td></td>
+                                    </tr>
+                                </table>
+                            </div>
+                            <p></p>
+                        </li>
+                        <li></li>
+                    </ul>
+                </div>
+                <div class="blog-post-item">
+                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                        <div class="timeline-vline"></div>
+                    </div>
+                    <ul class="blog-post-info list-inline">
+                        <li><span class="font-lato">July 26, 2016</span></li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>equencing products have arrived:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>6-26:Ga20ox gRNA:psgRNA in α1 -
+                                correct</li>
+                                <li>U6-26:TFL gRNA:psgRNA in α1 - correct</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <p></p>
+                    <ul>
+                        <li>inipreps with E.Z.N.A ®.® Plasmid Mini Kit I,
+                        Q(capless) Spin of:</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <ul>
+                                <li>5s:5’ region: Ga20ox PCR : Luc : Tnos in
+                                α1</li>
+                                <li>35s:5’ region: TFL PCR : Luc : Tnos in
+                                α1</li>
+                            </ul>
+                        </li>
+                    </ul>
+                    <ul>
+                        <li>Digestion of minipreps with the restriction enzyme
+                        EcoRI. Incubate 1 hour at 37^.</li>
+                        <li>Run electrophoresis gel of the digestion
+                        products.</li>
+                        <li style="list-style: none; display: inline">
+                            <div class="table-responsive" style=
+                            "width:55%;overflow:inherit">
+                                <div class="table-responsive" style=
+                                "width:55%;overflow:inherit">
+                                    <div class="blog-post-item">
+                                        <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                                            <div class="timeline-vline"></div>
+                                        </div>
+                                        <ul class="blog-post-info list-inline">
+                                            <li><span class="font-lato">July
+, 2016</span></li>
+                                        </ul>
+                                        <p></p>
+                                    </div>
+                                    <div class="blog-post-item">
+                                        <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                                            <div class="timeline-vline"></div>
+                                        </div>
+                                        <ul class="blog-post-info list-inline">
+                                            <li><span class="font-lato">July
+, 2016</span></li>
+                                        </ul>
+                                        <p></p>
+                                    </div>
+                                    <div class="table-responsive" style=
+                                    "width:55%;overflow:inherit">
+                                        <div class="table-responsive" style=
+                                        "width:55%;overflow:inherit">
+                                            <div class="blog-post-item">
+                                                <div class=
+                                                "timeline-entry rounded">
+<span>Jul</span>
+                                                    <div class=
+                                                    "timeline-vline"></div>
+                                                </div>
+                                                <ul class=
+                                                "blog-post-info list-inline">
+                                                    <li><span class=
+                                                    "font-lato">July 29,
+</span></li>
+                                                </ul>
+                                                <p></p>
+                                            </div>
+                                            <div class="blog-post-item">
+                                                <div class=
+                                                "timeline-entry rounded">
+<span>Aug</span>
+                                                    <div class=
+                                                    "timeline-vline"></div>
+                                                </div>
+                                                <ul class=
+                                                "blog-post-info list-inline">
+                                                    <li><span class=
+                                                    "font-lato">August 01,
+</span></li>
+                                                </ul>
+                                                <p></p>
+                                            </div>
+                                            <div class="blog-post-item">
+                                                <div class=
+                                                "timeline-entry rounded">
+<span>Aug</span>
+                                                    <div class=
+                                                    "timeline-vline"></div>
+                                                </div>
+                                                <ul class=
+                                                "blog-post-info list-inline">
+                                                    <li><span class=
+                                                    "font-lato">August 02,
+</span></li>
+                                                </ul>
+                                                <p></p>
+                                            </div>
+                                            <div class="table-responsive"
+                                            style="width:55%;overflow:inherit">
+                                                <div class="table-responsive"
+                                                style=
+                                                "width:55%;overflow:inherit">
+                                                    <div class=
+                                                    "blog-post-item">
+                                                        <div class=
+                                                        "timeline-entry rounded">
+<span>Aug</span>
+                                                            <div class=
+                                                            "timeline-vline">
+                                                            </div>
+                                                        </div>
+                                                        <ul class=
+                                                        "blog-post-info list-inline">
+                                                        <li><span class=
+                                                        "font-lato">August 03,
+</span></li>
+                                                        </ul>
+                                                        <p></p>
+                                                    </div>
+                                                    <div class=
+                                                    "table-responsive" style=
+                                                    "width:55%;overflow:inherit">
+                                                    <div class=
+                                                    "table-responsive"
+                                                        style="width:55%;overflow:inherit">
+                                                        <div class=
+                                                        "table-responsive"
+                                                        style=
+                                                        "width:55%;overflow:inherit">
+                                                            <div class=
+                                                            "table-responsive"
+                                                                style=
+                                                                "width:55%;overflow:inherit">
+                                                                <div class=
+                                                                "blog-post-item">
+                                                                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Aug</span>
+                                                                            <div class="timeline-vline">
+                                                                            </div>
+                                                                        </div>
+                                                                        <ul class="blog-post-info list-inline">
+                                                                        <li>
+                                                                            <span class="font-lato">
+                                                                            August
+,
+</span></li>
+                                                                        </ul>
+                                                                        <p></p>
+                                                                    </div>
+                                                                    <div class=
+                                                                    "blog-post-item">
+                                                                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Aug</span>
+                                                                            <div class="timeline-vline">
+                                                                            </div>
+                                                                        </div>
+                                                                        <ul class="blog-post-info list-inline">
+                                                                        <li>
+                                                                            <span class="font-lato">
+                                                                            August
+,
+</span></li>
+                                                                        </ul>
+                                                                        <p></p>
+                                                                    </div>
+                                                                    <div class=
+                                                                    "table-responsive"
+                                                                    style=
+                                                                    "width:55%;overflow:inherit">
+                                                                    <div class="table-responsive"
+                                                                        style=
+                                                                        "width:55%;overflow:inherit">
+                                                                        <div class="blog-post-item">
+                                                                            <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Aug</span>
+                                                                                    <div class="timeline-vline">
+                                                                                    </div>
+                                                                                </div>
+                                                                                <ul class="blog-post-info list-inline">
+                                                                                <li>
+                                                                                    <span class="font-lato">
+                                                                                    August
+,
+</span></li>
+                                                                                </ul>
+                                                                                <p>
+                                                                                </p>
+                                                                            </div>
+                                                                            <div class="blog-post-item">
+                                                                            <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Aug</span>
+                                                                                    <div class="timeline-vline">
+                                                                                    </div>
+                                                                                </div>
+                                                                                <ul class="blog-post-info list-inline">
+                                                                                <li>
+                                                                                    <span class="font-lato">
+                                                                                    August
+,
+</span></li>
+                                                                                </ul>
+                                                                                <p>
+                                                                                </p>
+                                                                            </div>
+                                                                            <div class="table-responsive"
+                                                                            style="width:55%;overflow:inherit">
+                                                                            <div class="table-responsive"
+                                                                                style="width:55%;overflow:inherit">
+                                                                                <div class="table-responsive"
+                                                                                    style="width:55%;overflow:inherit">
+                                                                                    <div class="table-responsive"
+                                                                                        style="width:55%;overflow:inherit">
+                                                                                        <div class="table-responsive"
+                                                                                            style="width:55%;overflow:inherit">
+                                                                                            <div class="table-responsive"
+                                                                                                style="width:55%;overflow:inherit">
+                                                                                                <div class="blog-post-item">
+                                                                                                    <div class="timeline-entry rounded">
+<span>Aug</span>
+                                                                                                            <div class="timeline-vline">
+                                                                                                            </div>
+                                                                                                        </div>
+                                                                                                        <ul class="blog-post-info list-inline">
+                                                                                                        <li>
+                                                                                                            <span class="font-lato">
+                                                                                                            August
+,
+</span></li>
+                                                                                                        </ul>
+                                                                                                        <p>
+                                                                                                        </p>
+                                                                                                    </div>
+                                                                                                    <div class="table-responsive"
+                                                                                                    style="width:55%;overflow:inherit">
+                                                                                                    <div class="table-responsive"
+                                                                                                        style="width:55%;overflow:inherit">
+                                                                                                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                                                                                                            </table>
+                                                                                                        </div>
+                                                                                                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                                                                                                        <tr>
+                                                                                                            <td>
+                                                                                                                <ul>
+                                                                                                                    <li>
+                                                                                                                        devices</li>
+                                                                                                                    </ul>
+                                                                                                                </td>
+                                                                                                                <td>
+                                                                                                                Volume
+                                                                                                                (μL)</td>
+                                                                                                            </tr>
+                                                                                                            <tr>
+                                                                                                            <td>
+                                                                                                                <ul>
+                                                                                                                    <li>
+                                                                                                                        gTS
+                                                                                                                        TFL/
+                                                                                                                        Ga20ox-
+                                                                                                                        Renilla</li>
+                                                                                                                    </ul>
+                                                                                                                </td>
+                                                                                                                <td>
+</td>
+                                                                                                            </tr>
+                                                                                                            <tr>
+                                                                                                            <td>
+                                                                                                                <ul>
+                                                                                                                    <li>
+                                                                                                                        Cas9
+                                                                                                                        -
+                                                                                                                        gRNA</li>
+                                                                                                                    </ul>
+                                                                                                                </td>
+                                                                                                                <td>
+</td>
+                                                                                                            </tr>
+                                                                                                            <tr>
+                                                                                                            <td>
+                                                                                                                <ul>
+                                                                                                                    <li>
+                                                                                                                        α
+                                                                                                                        plasmid</li>
+                                                                                                                    </ul>
+                                                                                                                </td>
+                                                                                                                <td>
+.2</td>
+                                                                                                            </tr>
+                                                                                                            <tr>
+                                                                                                            <td>
+                                                                                                                <ul>
+                                                                                                                    <li>
+                                                                                                                        Bsa
+x</li>
+                                                                                                                    </ul>
+                                                                                                                </td>
+                                                                                                                <td>
+.2</td>
+                                                                                                            </tr>
+                                                                                                            <tr>
+                                                                                                            <td>
+                                                                                                                <ul>
+                                                                                                                    <li>
+                                                                                                                        Buffer
+                                                                                                                        ligase</li>
+                                                                                                                    </ul>
+                                                                                                                </td>
+                                                                                                                <td>
+</td>
+                                                                                                            </tr>
+                                                                                                            <tr>
+                                                                                                            <td>
+                                                                                                                <ul>
+                                                                                                                    <li>
+                                                                                                                        Bsa
+                                                                                                                        I</li>
+                                                                                                                    </ul>
+                                                                                                                </td>
+                                                                                                                <td>
+</td>
+                                                                                                            </tr>
+                                                                                                            <tr>
+                                                                                                            <td>
+                                                                                                                <ul>
+                                                                                                                    <li>
+                                                                                                                        T4
+                                                                                                                        ligase</li>
+                                                                                                                    </ul>
+                                                                                                                </td>
+                                                                                                                <td>
+</td>
+                                                                                                            </tr>
+                                                                                                            <tr>
+                                                                                                            <td>
+                                                                                                                <ul>
+                                                                                                                    <li>
+                                                                                                                        H20
+                                                                                                                        milliQ</li>
+                                                                                                                    </ul>
+                                                                                                                </td>
+                                                                                                                <td>
+.6</td>
+                                                                                                            </tr>
+                                                                                                        </table>
+                                                                                                    </div>
+                                                                                                    <table class="table table-bordered table-striped">
+                                                                                                    <tr>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                            <ul>
+                                                                                                                <li>
+                                                                                                                    Run
+                                                                                                                    electrophoresis
+                                                                                                                    gel
+                                                                                                                    of:
+s:
+’
+                                                                                                                    region:
+                                                                                                                    TFL/Ga20oxPCR:
+                                                                                                                    Luc:
+                                                                                                                    Tnos
+                                                                                                                    –
+s:
+                                                                                                                    Renilla:
+                                                                                                                    Tnos.
+                                                                                                                    We
+                                                                                                                    keep
+                                                                                                                    the
+                                                                                                                    Miniprep
+                                                                                                                    number
+.</li>
+                                                                                                                </ul>
+                                                                                                            </td>
+                                                                                                        </tr>
+                                                                                                        <tr>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                            <ul>
+                                                                                                                <li>
+                                                                                                                    Refresh
+                                                                                                                    the
+                                                                                                                    cultures
+                                                                                                                    of
+                                                                                                                    TFL
+                                                                                                                    PCR
+                                                                                                                    (pUPD2)
+                                                                                                                    and
+                                                                                                                    Ga20oxPCR
+                                                                                                                    (pUPD2)
+                                                                                                                    because
+                                                                                                                    we
+                                                                                                                    suspect
+                                                                                                                    that
+                                                                                                                    these
+                                                                                                                    cultures
+                                                                                                                    are
+                                                                                                                    the
+                                                                                                                    correct
+                                                                                                                    ones
+                                                                                                                    but
+                                                                                                                    we
+                                                                                                                    are
+                                                                                                                    not
+                                                                                                                    sure
+                                                                                                                    so
+                                                                                                                    we
+                                                                                                                    want
+                                                                                                                    to
+                                                                                                                    check
+                                                                                                                    them.
+                                                                                                                    The
+                                                                                                                    cultures
+                                                                                                                    that
+                                                                                                                    we
+                                                                                                                    use
+                                                                                                                    to
+                                                                                                                    refresh
+                                                                                                                    were
+                                                                                                                    made
+                                                                                                                    on
+/07/2016.
+                                                                                                                    It
+                                                                                                                    is
+                                                                                                                    important
+                                                                                                                    to
+                                                                                                                    remember
+                                                                                                                    that
+                                                                                                                    we
+                                                                                                                    need
+                                                                                                                    them
+                                                                                                                    to
+                                                                                                                    assemble
+                                                                                                                    the
+                                                                                                                    gTS
+                                                                                                                    with
+                                                                                                                    the
+                                                                                                                    new
+                                                                                                                    linkers.</li>
+                                                                                                                </ul>
+                                                                                                            </td>
+                                                                                                        </tr>
+                                                                                                        <tr>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                            <ul>
+                                                                                                                <li>
+                                                                                                                    </li>
+                                                                                                                </ul>
+                                                                                                            </td>
+                                                                                                        </tr>
+                                                                                                        <tr>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                            <ul>
+                                                                                                                <li>
+                                                                                                                    Miniprep
+                                                                                                                    with
+                                                                                                                    E.Z.N.A
+                                                                                                                    ®.®
+                                                                                                                    Plasmid
+                                                                                                                    Mini
+                                                                                                                    Kit
+                                                                                                                    I,
+                                                                                                                    Q(capless)
+                                                                                                                    Spin
+                                                                                                                    of
+                                                                                                                    TFL
+                                                                                                                    /
+                                                                                                                    Ga20oxPCR
+                                                                                                                    in
+                                                                                                                    pUPD2</li>
+                                                                                                                </ul>
+                                                                                                            </td>
+                                                                                                        </tr>
+                                                                                                        <tr>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                            <ul>
+                                                                                                                <li>
+                                                                                                                    Digestion
+                                                                                                                    of
+                                                                                                                    minipreps
+                                                                                                                    with
+                                                                                                                    NotI.
+                                                                                                                    Incubate
+                                                                                                                    hour
+                                                                                                                    at
+^</li>
+                                                                                                                </ul>
+                                                                                                            </td>
+                                                                                                        </tr>
+                                                                                                        <tr>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                            <ul>
+                                                                                                                <li>
+                                                                                                                    Run
+                                                                                                                    electrophoresis
+                                                                                                                    gel
+                                                                                                                    of
+                                                                                                                    Miniprep
+                                                                                                                    products.
+                                                                                                                    We
+                                                                                                                    have
+                                                                                                                    made
+                                                                                                                    a
+                                                                                                                    small
+                                                                                                                    gel
+                                                                                                                    so
+                                                                                                                    we
+                                                                                                                    have
+                                                                                                                    mix
+.45
+                                                                                                                    g
+                                                                                                                    of
+                                                                                                                    Agarose
+                                                                                                                    with
+                                                                                                                    mL
+                                                                                                                    of
+                                                                                                                    TAE
+X.
+                                                                                                                    Voltage
+                                                                                                                    used
+                                                                                                                    is
+V.
+                                                                                                                    Both
+                                                                                                                    samples
+                                                                                                                    are
+                                                                                                                    correct.</li>
+                                                                                                                </ul>
+                                                                                                            </td>
+                                                                                                        </tr>
+                                                                                                        <tr>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                            <ul>
+                                                                                                                <li>
+                                                                                                                    Pick
+                                                                                                                    a
+                                                                                                                    single
+                                                                                                                    E.
+                                                                                                                    coli
+                                                                                                                    DH5α
+                                                                                                                    (promoter35s:
+’
+                                                                                                                    region:
+                                                                                                                    TFL/Ga20oxcons:
+                                                                                                                    Tnos
+                                                                                                                    -
+                                                                                                                    promoter35s:
+                                                                                                                    Renilla:
+                                                                                                                    Tnos
+                                                                                                                    -
+s:
+                                                                                                                    Cas9:
+                                                                                                                    Tnos
+                                                                                                                    -
+                                                                                                                    U6:
+                                                                                                                    TFL/Ga20oxgRNA:
+                                                                                                                    psgRNA)
+                                                                                                                    colony
+                                                                                                                    from
+                                                                                                                    the
+                                                                                                                    plate
+                                                                                                                    that
+                                                                                                                    has
+                                                                                                                    been
+                                                                                                                    incubated
+                                                                                                                    overnight.
+                                                                                                                    Inoculate
+                                                                                                                    a
+                                                                                                                    starter
+                                                                                                                    culture
+                                                                                                                    of
+                                                                                                                    ml
+                                                                                                                    of
+                                                                                                                    LB
+                                                                                                                    medium
+                                                                                                                    with
+                                                                                                                    μL
+                                                                                                                    of
+                                                                                                                    chloramphenicol
+                                                                                                                    in
+                                                                                                                    a
+                                                                                                                    ml
+                                                                                                                    tube
+                                                                                                                    with
+                                                                                                                    the
+                                                                                                                    colony
+                                                                                                                    and
+                                                                                                                    incubate
+                                                                                                                    it
+                                                                                                                    overnight
+                                                                                                                    at
+^
+                                                                                                                    with
+                                                                                                                    shaking.</li>
+                                                                                                                </ul>
+                                                                                                            </td>
+                                                                                                        </tr>
+                                                                                                        <tr>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                            <ul>
+                                                                                                                <li>
+                                                                                                                    We
+                                                                                                                    throw
+                                                                                                                    out
+                                                                                                                    from
+                                                                                                                    Golden
+                                                                                                                    Braid
+                                                                                                                    collection
+                                                                                                                    the
+                                                                                                                    glycerinate
+                                                                                                                    number
+                                                                                                                    (Cas9
+                                                                                                                    -
+                                                                                                                    XT1gRNA)
+                                                                                                                    and
+                                                                                                                    (35s:
+                                                                                                                    TEV:
+                                                                                                                    Tnos)</li>
+                                                                                                                </ul>
+                                                                                                            </td>
+                                                                                                        </tr>
+                                                                                                        <tr>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                            <ul>
+                                                                                                                <li>
+                                                                                                                    Ligation
+                                                                                                                    reaction
+                                                                                                                    of
+s:
+’
+                                                                                                                    region:
+                                                                                                                    TFL/
+                                                                                                                    Ga20:
+                                                                                                                    Tnos
+                                                                                                                    -
+s:
+                                                                                                                    Renilla:
+                                                                                                                    Tnos
+                                                                                                                    +
+s:
+                                                                                                                    Cas9:
+                                                                                                                    Tnos
+                                                                                                                    -
+                                                                                                                    U6:
+                                                                                                                    TFL/Ga20oxgRNA:
+                                                                                                                    psgRNA</li>
+                                                                                                                </ul>
+                                                                                                            </td>
+                                                                                                        </tr>
+                                                                                                    </table>
+                                                                                                </div>
+                                                                                                <table class="table table-bordered table-striped">
+                                                                                                <tr>
+                                                                                                    <td>
+                                                                                                        <ul>
+                                                                                                            <li>
+</li>
+                                                                                                            </ul>
+                                                                                                        </td>
+                                                                                                        <td>
+s:5’:Ga20cons:Luc:Tnos</td>
+                                                                                                        <td>
+α1</td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        KAN</td>
+                                                                                                    </tr>
+                                                                                                    <tr>
+                                                                                                    <td>
+                                                                                                        <ul>
+                                                                                                            <li>
+</li>
+                                                                                                            </ul>
+                                                                                                        </td>
+                                                                                                        <td>
+s:5’:Ga20KO:Luc:Tnos</td>
+                                                                                                        <td>
+α1</td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        KAN</td>
+                                                                                                    </tr>
+                                                                                                    <tr>
+                                                                                                    <td>
+                                                                                                        <ul>
+                                                                                                            <li>
+</li>
+                                                                                                            </ul>
+                                                                                                        </td>
+                                                                                                        <td>
+s:5’:TFLcons:Luc:Tnos</td>
+                                                                                                        <td>
+α1</td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        KAN</td>
+                                                                                                    </tr>
+                                                                                                    <tr>
+                                                                                                    <td>
+                                                                                                        <ul>
+                                                                                                            <li>
+</li>
+                                                                                                            </ul>
+                                                                                                        </td>
+                                                                                                        <td>
+s:5’:TFLKO:Luc:Tnos</td>
+                                                                                                        <td>
+α1</td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        KAN</td>
+                                                                                                    </tr>
+                                                                                                    <tr>
+                                                                                                    <td>
+                                                                                                        <ul>
+                                                                                                            <li>
+</li>
+                                                                                                            </ul>
+                                                                                                        </td>
+                                                                                                        <td>
+s:5’:Ga20cons:Luc:Tnos-35s:Ren:Tnos</td>
+                                                                                                        <td>
+Ω2</td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        SPEC</td>
+                                                                                                    </tr>
+                                                                                                    <tr>
+                                                                                                    <td>
+                                                                                                        <ul>
+                                                                                                            <li>
+</li>
+                                                                                                            </ul>
+                                                                                                        </td>
+                                                                                                        <td>
+s:5’:Ga20KO:Luc:Tnos-35s:Ren:Tnos</td>
+                                                                                                        <td>
+Ω2</td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        SPEC</td>
+                                                                                                    </tr>
+                                                                                                    <tr>
+                                                                                                    <td>
+                                                                                                        <ul>
+                                                                                                            <li>
+</li>
+                                                                                                            </ul>
+                                                                                                        </td>
+                                                                                                        <td>
+s:5’:Ga20PCR:Luc:Tnos-35s:Ren:Tnos</td>
+                                                                                                        <td>
+Ω2</td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        SPEC</td>
+                                                                                                    </tr>
+                                                                                                    <tr>
+                                                                                                    <td>
+                                                                                                        <ul>
+                                                                                                            <li>
+</li>
+                                                                                                            </ul>
+                                                                                                        </td>
+                                                                                                        <td>
+s:5’:TFLcons:Luc:Tnos-35s:Ren:Tnos</td>
+                                                                                                        <td>
+Ω2</td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        SPEC</td>
+                                                                                                    </tr>
+                                                                                                    <tr>
+                                                                                                    <td>
+                                                                                                        <ul>
+                                                                                                            <li>
+</li>
+                                                                                                            </ul>
+                                                                                                        </td>
+                                                                                                        <td>
+s:5’:TFLKO:Luc:Tnos-35s:Ren:Tnos</td>
+                                                                                                        <td>
+Ω2</td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        SPEC</td>
+                                                                                                    </tr>
+                                                                                                    <tr>
+                                                                                                    <td>
+                                                                                                        <ul>
+                                                                                                            <li>
+</li>
+                                                                                                            </ul>
+                                                                                                        </td>
+                                                                                                        <td>
+s:5’:TFLPCR:Luc:Tnos-35s:Ren:Tnos</td>
+                                                                                                        <td>
+Ω2</td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        SPEC</td>
+                                                                                                    </tr>
+                                                                                                    <tr>
+                                                                                                    <td>
+                                                                                                        <ul>
+                                                                                                            <li>
+</li>
+                                                                                                            </ul>
+                                                                                                        </td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        U6:Ga20sgRNA:psgRNA</td>
+                                                                                                        <td>
+α1</td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        KAN</td>
+                                                                                                    </tr>
+                                                                                                    <tr>
+                                                                                                    <td>
+                                                                                                        <ul>
+                                                                                                            <li>
+</li>
+                                                                                                            </ul>
+                                                                                                        </td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        U6:TFLsgRNA:psgRNA</td>
+                                                                                                        <td>
+α1</td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        KAN</td>
+                                                                                                    </tr>
+                                                                                                    <tr>
+                                                                                                    <td>
+                                                                                                        <ul>
+                                                                                                            <li>
+</li>
+                                                                                                            </ul>
+                                                                                                        </td>
+                                                                                                        <td>
+s:Cas9:Tnos-U6:Ga20gRNA:psgRNA</td>
+                                                                                                        <td>
+Ω1</td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        SPEC</td>
+                                                                                                    </tr>
+                                                                                                    <tr>
+                                                                                                    <td>
+                                                                                                        <ul>
+                                                                                                            <li>
+</li>
+                                                                                                            </ul>
+                                                                                                        </td>
+                                                                                                        <td>
+s:Cas9:Tnos-U6:TFLgRNA:psgRNA</td>
+                                                                                                        <td>
+Ω1</td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        SPEC</td>
+                                                                                                    </tr>
+                                                                                                    <tr>
+                                                                                                    <td>
+                                                                                                        <ul>
+                                                                                                            <li>
+</li>
+                                                                                                            </ul>
+                                                                                                        </td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        Ga20PCR</td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        pUPD2</td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        CAM</td>
+                                                                                                    </tr>
+                                                                                                    <tr>
+                                                                                                    <td>
+                                                                                                        <ul>
+                                                                                                            <li>
+</li>
+                                                                                                            </ul>
+                                                                                                        </td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        TFLPCR</td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        pUPD2</td>
+                                                                                                        <td>
+                                                                                                        CAM</td>
+                                                                                                    </tr>
+                                                                                                </table>
+                                                                                            </div>
+                                                                                            <table class="table table-bordered table-striped">
+                                                                                            <tr>
+                                                                                                <td>
+                                                                                                    <ul>
+                                                                                                        <li>
+                                                                                                            Transform
+                                                                                                            the
+                                                                                                            products
+                                                                                                            of
+                                                                                                            ligation
+                                                                                                            in
+                                                                                                            DH5
+                                                                                                            α.
+                                                                                                            Incubate
+                                                                                                            it
+                                                                                                            at
+^
+                                                                                                            during
+                                                                                                            hours.</li>
+                                                                                                        </ul>
+                                                                                                    </td>
+                                                                                                </tr>
+                                                                                                <tr>
+                                                                                                <td>
+                                                                                                    <ul>
+                                                                                                        <li>
+                                                                                                            We
+                                                                                                            store
+                                                                                                            at
+                                                                                                            -80^:</li>
+                                                                                                        </ul>
+                                                                                                    </td>
+                                                                                                </tr>
+                                                                                            </table>
+                                                                                        </div>
+                                                                                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                                                                                        <tr>
+                                                                                            <td>
+                                                                                                <ul>
+                                                                                                    <li>
+                                                                                                        Promoter35s</li>
+                                                                                                    </ul>
+                                                                                                </td>
+                                                                                                <td>
+                                                                                                pNos</td>
+                                                                                            </tr>
+                                                                                            <tr>
+                                                                                            <td>
+                                                                                                <ul>
+                                                                                                    <li>
+                                                                                                        TFLKO</li>
+                                                                                                    </ul>
+                                                                                                </td>
+                                                                                                <td>
+                                                                                                Ga20KO</td>
+                                                                                            </tr>
+                                                                                            <tr>
+                                                                                            <td>
+                                                                                                <ul>
+                                                                                                    <li>
+                                                                                                        TFLPCRXT1</li>
+                                                                                                    </ul>
+                                                                                                </td>
+                                                                                                <td>
+                                                                                                Ga20PCRXT1</td>
+                                                                                            </tr>
+                                                                                            <tr>
+                                                                                            <td>
+                                                                                                <ul>
+                                                                                                    <li>
+                                                                                                        TFLPCROK</li>
+                                                                                                    </ul>
+                                                                                                </td>
+                                                                                                <td>
+                                                                                                Ga20PCROK</td>
+                                                                                            </tr>
+                                                                                            <tr>
+                                                                                            <td>
+                                                                                                <ul>
+                                                                                                    <li>
+                                                                                                        TFLconsOK</li>
+                                                                                                    </ul>
+                                                                                                </td>
+                                                                                                <td>
+                                                                                                Ga20consOK</td>
+                                                                                            </tr>
+                                                                                        </table>
+                                                                                    </div>
+                                                                                    <table class="table table-bordered table-striped">
+                                                                                    <tr>
+                                                                                        <td>
+                                                                                            <ul>
+                                                                                                <li>
+                                                                                                    U6:Ga20oxgRNA:
+                                                                                                    psgRNA
+                                                                                                    -
+s:
+                                                                                                    Cas9:
+                                                                                                    Tnos
+                                                                                                    -
+                                                                                                    Miniprep
+                                                                                                    number
+                                                                                                    was
+                                                                                                    empty.
+                                                                                                    We
+                                                                                                    have
+                                                                                                    resuspended
+                                                                                                    it
+                                                                                                    with
+                                                                                                    μL
+                                                                                                    of
+                                                                                                    H20
+                                                                                                    milliQ
+                                                                                                    and
+                                                                                                    we
+                                                                                                    have
+                                                                                                    checked
+                                                                                                    the
+                                                                                                    DNA
+                                                                                                    concentration
+                                                                                                    with
+                                                                                                    the
+                                                                                                    Nanodrop.
+                                                                                                    The
+                                                                                                    results
+                                                                                                    show
+                                                                                                    us
+                                                                                                    that
+                                                                                                    the
+                                                                                                    DNA
+                                                                                                    concentration
+                                                                                                    in
+                                                                                                    the
+                                                                                                    Eppendorf
+                                                                                                    was
+                                                                                                    ng/
+                                                                                                    μL
+                                                                                                    so
+                                                                                                    we
+                                                                                                    have
+                                                                                                    used
+                                                                                                    it.</li>
+                                                                                                </ul>
+                                                                                            </td>
+                                                                                        </tr>
+                                                                                        <tr>
+                                                                                        <td>
+                                                                                            <ul>
+                                                                                                <li>
+                                                                                                    Miniprep
+                                                                                                    with
+                                                                                                    E.Z.N.A
+                                                                                                    ®.®
+                                                                                                    Plasmid
+                                                                                                    Mini
+                                                                                                    Kit
+                                                                                                    I,
+                                                                                                    Q(capless)
+                                                                                                    Spin
+                                                                                                    of
+s:
+’
+                                                                                                    region:
+                                                                                                    TFL/Ga20oxPCR:
+                                                                                                    Luc:
+                                                                                                    Tnos
+                                                                                                    –
+s:
+                                                                                                    Renilla:
+                                                                                                    Tnos</li>
+                                                                                                </ul>
+                                                                                            </td>
+                                                                                        </tr>
+                                                                                        <tr>
+                                                                                        <td>
+                                                                                            <ul>
+                                                                                                <li>
+                                                                                                    Transform
+                                                                                                    in
+                                                                                                    C58
+                                                                                                    <i>
+                                                                                                    Agrobacterium</i>
+s:
+                                                                                                    Renilla
+                                                                                                    :
+                                                                                                    Tnos
+                                                                                                    (3
+                                                                                                    α2)</li>
+                                                                                                </ul>
+                                                                                            </td>
+                                                                                        </tr>
+                                                                                        <tr>
+                                                                                        <td>
+                                                                                            <ul>
+                                                                                                <li>
+                                                                                                    Plating
+                                                                                                    promoter35s:
+                                                                                                    Renilla:
+                                                                                                    Tnos
+                                                                                                    (3α2)</li>
+                                                                                                </ul>
+                                                                                            </td>
+                                                                                        </tr>
+                                                                                        <tr>
+                                                                                        <td>
+                                                                                            <ul>
+                                                                                                <li>
+                                                                                                    Luciferase
+                                                                                                    assay</li>
+                                                                                                </ul>
+                                                                                            </td>
+                                                                                        </tr>
+                                                                                    </table>
+                                                                                </div>
+                                                                                <table class="table table-bordered table-striped">
+                                                                                <tr>
+                                                                                    <td>
+                                                                                        <ul>
+                                                                                            <li>
+                                                                                                devices</li>
+                                                                                            </ul>
+                                                                                        </td>
+                                                                                        <td>
+                                                                                        Volume
+                                                                                        (μL)</td>
+                                                                                    </tr>
+                                                                                    <tr>
+                                                                                    <td>
+                                                                                        <ul>
+                                                                                            <li>
+s
+                                                                                                :
+’
+                                                                                                region:
+                                                                                                Ga20/TFL
+                                                                                                KO:
+                                                                                                Luc:
+                                                                                                Tnos
+                                                                                                -
+s:
+                                                                                                Renilla:
+                                                                                                Tnos
+                                                                                                -
+s:
+                                                                                                hCas9:
+                                                                                                Tnos:
+                                                                                                U6:
+                                                                                                Ga20/TFL
+                                                                                                gRNA:
+                                                                                                psgRNA</li>
+                                                                                            </ul>
+                                                                                        </td>
+                                                                                        <td>
+</td>
+                                                                                    </tr>
+                                                                                    <tr>
+                                                                                    <td>
+                                                                                        <ul>
+                                                                                            <li>
+s
+                                                                                                :
+’
+                                                                                                region:
+                                                                                                Ga20/TFL
+                                                                                                cons:
+                                                                                                Luc:
+                                                                                                Tnos
+                                                                                                -
+s:
+                                                                                                Renilla:
+                                                                                                Tnos
+                                                                                                -
+s:
+                                                                                                hCas9:
+                                                                                                Tnos:
+                                                                                                U6:
+                                                                                                Ga20/TFL
+                                                                                                gRNA:
+                                                                                                psgRNA</li>
+                                                                                            </ul>
+                                                                                        </td>
+                                                                                        <td>
+</td>
+                                                                                    </tr>
+                                                                                    <tr>
+                                                                                    <td>
+                                                                                        <ul>
+                                                                                            <li>
+                                                                                                α
+                                                                                                plasmid</li>
+                                                                                            </ul>
+                                                                                        </td>
+                                                                                        <td>
+.2</td>
+                                                                                    </tr>
+                                                                                    <tr>
+                                                                                    <td>
+                                                                                        <ul>
+                                                                                            <li>
+                                                                                                Bsa
+X</li>
+                                                                                            </ul>
+                                                                                        </td>
+                                                                                        <td>
+.2</td>
+                                                                                    </tr>
+                                                                                    <tr>
+                                                                                    <td>
+                                                                                        <ul>
+                                                                                            <li>
+                                                                                                Buffer
+                                                                                                ligase</li>
+                                                                                            </ul>
+                                                                                        </td>
+                                                                                        <td>
+</td>
+                                                                                    </tr>
+                                                                                    <tr>
+                                                                                    <td>
+                                                                                        <ul>
+                                                                                            <li>
+                                                                                                Bsa
+                                                                                                I</li>
+                                                                                            </ul>
+                                                                                        </td>
+                                                                                        <td>
+</td>
+                                                                                    </tr>
+                                                                                    <tr>
+                                                                                    <td>
+                                                                                        <ul>
+                                                                                            <li>
+                                                                                                T4
+                                                                                                ligase</li>
+                                                                                            </ul>
+                                                                                        </td>
+                                                                                        <td>
+</td>
+                                                                                    </tr>
+                                                                                    <tr>
+                                                                                    <td>
+                                                                                        <ul>
+                                                                                            <li>
+                                                                                                H20
+                                                                                                milliQ</li>
+                                                                                            </ul>
+                                                                                        </td>
+                                                                                        <td>
+.6</td>
+                                                                                    </tr>
+                                                                                </table>
+                                                                            </div>
+                                                                            <table class="table table-bordered table-striped">
+                                                                            <tr>
+                                                                                <td>
+                                                                                    <p></p>
+                                                                                        <ul>
+                                                                                        <li>
+                                                                                            nfiltration
+                                                                                            cultures:</li>
+                                                                                        </ul>
+                                                                                    </td>
+                                                                                </tr>
+                                                                                <tr>
+                                                                                <td>
+                                                                                    <p></p>
+                                                                                        <ul>
+                                                                                        <li>
+s:
+                                                                                            Luc:
+                                                                                            Tnos</li>
+                                                                                        </ul>
+                                                                                    </td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    Laboratory
+                                                                                    controls</td>
+                                                                                </tr>
+                                                                                <tr>
+                                                                                <td>
+                                                                                    <ul>
+                                                                                        <li>
+                                                                                            </li>
+                                                                                        </ul>
+                                                                                    </td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    Pnos:
+                                                                                    Luc:
+                                                                                    Tnos</td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    Laboratory
+                                                                                    controls</td>
+                                                                                </tr>
+                                                                                <tr>
+                                                                                <td>
+                                                                                    <ul>
+                                                                                        <li>
+                                                                                            </li>
+                                                                                        </ul>
+                                                                                    </td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    gTS
+                                                                                    TFL
+                                                                                    KO
+                                                                                    +
+                                                                                    Cas9
+                                                                                    -
+                                                                                    XT1:XT2</td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    Positive
+                                                                                    controls</td>
+                                                                                </tr>
+                                                                                <tr>
+                                                                                <td>
+                                                                                    <ul>
+                                                                                        <li>
+                                                                                            </li>
+                                                                                        </ul>
+                                                                                    </td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    gTSGa20oxKO
+                                                                                    +
+                                                                                    Cas9
+                                                                                    -
+                                                                                    XT1:XT2</td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    Positive
+                                                                                    controls</td>
+                                                                                </tr>
+                                                                                <tr>
+                                                                                <td>
+                                                                                    <ul>
+                                                                                        <li>
+                                                                                            </li>
+                                                                                        </ul>
+                                                                                    </td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    gTS
+                                                                                    TFL
+                                                                                    PCR
+                                                                                    +
+                                                                                    Cas9
+                                                                                    -
+                                                                                    XT1:XT2</td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    Negative
+                                                                                    controls</td>
+                                                                                </tr>
+                                                                                <tr>
+                                                                                <td>
+                                                                                    <ul>
+                                                                                        <li>
+                                                                                            </li>
+                                                                                        </ul>
+                                                                                    </td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    gTS
+                                                                                    Ga20oxPCR
+                                                                                    +
+                                                                                    Cas9
+                                                                                    -
+                                                                                    XT1:XT2</td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    Negative
+                                                                                    controls</td>
+                                                                                </tr>
+                                                                                <tr>
+                                                                                <td>
+                                                                                    <ul>
+                                                                                        <li>
+                                                                                            </li>
+                                                                                        </ul>
+                                                                                    </td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    gTS
+                                                                                    TFL
+                                                                                    PCR
+                                                                                    +
+                                                                                    Cas9
+                                                                                    -
+                                                                                    TFLgRNA</td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    Samples</td>
+                                                                                </tr>
+                                                                                <tr>
+                                                                                <td>
+                                                                                    <ul>
+                                                                                        <li>
+                                                                                            </li>
+                                                                                        </ul>
+                                                                                    </td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    gTS
+                                                                                    TFL
+                                                                                    cons
+                                                                                    +
+                                                                                    Cas9
+                                                                                    -
+                                                                                    TFLgRNA</td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    Samples</td>
+                                                                                </tr>
+                                                                                <tr>
+                                                                                <td>
+                                                                                    <ul>
+                                                                                        <li>
+                                                                                            </li>
+                                                                                        </ul>
+                                                                                    </td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    gTS
+                                                                                    Ga20oxPCR
+                                                                                    +
+                                                                                    Cas9
+                                                                                    -
+                                                                                    Ga20gRNA</td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    Samples</td>
+                                                                                </tr>
+                                                                                <tr>
+                                                                                <td>
+                                                                                    <ul>
+                                                                                        <li>
+                                                                                            </li>
+                                                                                        </ul>
+                                                                                    </td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    gTS
+                                                                                    Ga20oxcons
+                                                                                    +
+                                                                                    Cas9
+                                                                                    -
+                                                                                    Ga20gRNA</td>
+                                                                                    <td>
+                                                                                    Samples</td>
+                                                                                </tr>
+                                                                                <tr>
+                                                                                <td>
+                                                                                    </td>
+                                                                                </tr>
+                                                                                <tr>
+                                                                                <td>
+                                                                                    </td>
+                                                                                </tr>
+                                                                                <tr>
+                                                                                <td>
+                                                                                    <ul>
+                                                                                        <li>
+                                                                                            Transplant
+                                                                                            agroinfiltrated
+                                                                                            plants
+                                                                                            (<i>Nicotiana
+                                                                                            benthamiana</i>)</li>
+                                                                                        </ul>
+                                                                                    </td>
+                                                                                </tr>
+                                                                                <tr>
+                                                                                <td>
+                                                                                    <ul>
+                                                                                        <li>
+                                                                                            Pick
+                                                                                            up
+                                                                                            disks
+                                                                                            per
+                                                                                            each
+                                                                                            plant
+                                                                                            in
+                                                                                            order
+                                                                                            to
+                                                                                            carry
+                                                                                            out
+                                                                                            the
+                                                                                            luciferase
+                                                                                            assay
+                                                                                            on
+/08</li>
+                                                                                        </ul>
+                                                                                    </td>
+                                                                                </tr>
+                                                                                <tr>
+                                                                                <td>
+                                                                                    <ul>
+                                                                                        <li>
+                                                                                            Ligate
+                                                                                            reaction
+                                                                                            of:</li>
+                                                                                        </ul>
+                                                                                    </td>
+                                                                                </tr>
+                                                                            </table>
+                                                                        </div>
+                                                                        <table class="table table-bordered table-striped">
+                                                                        <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                                <ul>
+                                                                                    <li>
+                                                                                        device</li>
+                                                                                    </ul>
+                                                                                </td>
+                                                                                <td>
+                                                                                Volume
+                                                                                of
+                                                                                culture
+                                                                                (mL)</td>
+                                                                                <td>
+                                                                                Volume
+                                                                                of
+                                                                                Agroinfiltration
+                                                                                solution
+                                                                                (mL)</td>
+                                                                            </tr>
+                                                                            <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                                <ul>
+                                                                                    <li>
+                                                                                        Cas9
+                                                                                        -
+                                                                                        TFL
+                                                                                        gRNA</li>
+                                                                                    </ul>
+                                                                                </td>
+                                                                                <td>
+.7</td>
+                                                                                <td>
+.3</td>
+                                                                            </tr>
+                                                                            <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                                <ul>
+                                                                                    <li>
+                                                                                        Cas
+                                                                                        -
+                                                                                        Ga20oxgRNA</li>
+                                                                                    </ul>
+                                                                                </td>
+                                                                                <td>
+.7</td>
+                                                                                <td>
+.3</td>
+                                                                            </tr>
+                                                                            <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                                <ul>
+                                                                                    <li>
+                                                                                        Cas
+                                                                                        -
+                                                                                        XT1:
+                                                                                        XT2</li>
+                                                                                    </ul>
+                                                                                </td>
+                                                                                <td>
+.59</td>
+                                                                                <td>
+.41</td>
+                                                                            </tr>
+                                                                            <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                                <ul>
+                                                                                    <li>
+                                                                                        TFL
+                                                                                        KO</li>
+                                                                                    </ul>
+                                                                                </td>
+                                                                                <td>
+.67</td>
+                                                                                <td>
+.33</td>
+                                                                            </tr>
+                                                                            <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                                <ul>
+                                                                                    <li>
+                                                                                        TFL
+                                                                                        PCR</li>
+                                                                                    </ul>
+                                                                                </td>
+                                                                                <td>
+.73</td>
+                                                                                <td>
+.27</td>
+                                                                            </tr>
+                                                                            <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                                <ul>
+                                                                                    <li>
+                                                                                        Ga20oxconsensus</li>
+                                                                                    </ul>
+                                                                                </td>
+                                                                                <td>
+.71</td>
+                                                                                <td>
+.28</td>
+                                                                            </tr>
+                                                                            <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                                <ul>
+                                                                                    <li>
+                                                                                        Pnos</li>
+                                                                                    </ul>
+                                                                                </td>
+                                                                                <td>
+.68</td>
+                                                                                <td>
+.32</td>
+                                                                            </tr>
+                                                                            <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                                <ul>
+                                                                                    <li>
+s
+                                                                                        :
+                                                                                        Luc</li>
+                                                                                    </ul>
+                                                                                </td>
+                                                                                <td>
+.78</td>
+                                                                                <td>
+.22</td>
+                                                                            </tr>
+                                                                            <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                                <ul>
+                                                                                    <li>
+                                                                                        Ga20oxPCR</li>
+                                                                                    </ul>
+                                                                                </td>
+                                                                                <td>
+.74</td>
+                                                                                <td>
+.26</td>
+                                                                            </tr>
+                                                                            <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                                <ul>
+                                                                                    <li>
+                                                                                        TFL
+                                                                                        consensus</li>
+                                                                                    </ul>
+                                                                                </td>
+                                                                                <td>
+.71</td>
+                                                                                <td>
+.29</td>
+                                                                            </tr>
+                                                                            <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                                <ul>
+                                                                                    <li>
+                                                                                        Ga20ox-
+                                                                                        KO</li>
+                                                                                    </ul>
+                                                                                </td>
+                                                                                <td>
+.73</td>
+                                                                                <td>
+.27</td>
+                                                                            </tr>
+                                                                        </table>
+                                                                    </div>
+                                                                    <table class="table table-bordered table-striped">
+                                                                    <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                                <li>
+                                                                                    Miniprep
+                                                                                    with
+                                                                                    E.Z.N.A
+                                                                                    ®.®
+                                                                                    Plasmid
+                                                                                    Mini
+                                                                                    Kit
+                                                                                    I,
+                                                                                    Q(capless)
+                                                                                    Spin
+                                                                                    of
+                                                                                    TMV
+                                                                                    CDS</li>
+                                                                                </ul>
+                                                                            </td>
+                                                                        </tr>
+                                                                        <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                                <li>
+                                                                                    Transform
+                                                                                    DH5
+                                                                                    α
+                                                                                    <i>
+                                                                                    E.
+                                                                                    coli</i>
+                                                                                    with
+                                                                                    the
+                                                                                    device
+s
+                                                                                    :
+’
+                                                                                    region:
+                                                                                    PCR
+                                                                                    PCR:
+                                                                                    Luc:
+                                                                                    Tnos
+                                                                                    -
+s:
+                                                                                    Renilla:
+                                                                                    Tnos.
+                                                                                    After
+                                                                                    incubating
+                                                                                    hours,
+                                                                                    it
+                                                                                    must
+                                                                                    be
+                                                                                    plated.</li>
+                                                                                </ul>
+                                                                            </td>
+                                                                        </tr>
+                                                                        <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                                <li>
+                                                                                    Refresh
+                                                                                    C58
+                                                                                    <i>
+                                                                                    <i>
+                                                                                    Agrobacterium</i>
+                                                                                    tumefaciens</i>
+                                                                                    cultures
+                                                                                    with
+                                                                                    the
+                                                                                    aim
+                                                                                    of
+                                                                                    infiltrating
+                                                                                    in
+                                                                                    N.benthamiana
+                                                                                    on
+/08.</li>
+                                                                                </ul>
+                                                                            </td>
+                                                                        </tr>
+                                                                        <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                                <li>
+                                                                                    Pick
+                                                                                    a
+                                                                                    single
+                                                                                    E.
+                                                                                    coli
+                                                                                    DH5α
+                                                                                    (35S
+                                                                                    :
+’
+                                                                                    region:
+                                                                                    KO/cons
+                                                                                    target:
+                                                                                    Luc:Tnos
+                                                                                    -
+                                                                                    promoter35s:
+                                                                                    renilla:
+                                                                                    Tnos)
+                                                                                    colony
+                                                                                    from
+                                                                                    the
+                                                                                    plate
+                                                                                    that
+                                                                                    has
+                                                                                    been
+                                                                                    incubated
+                                                                                    overnight.
+                                                                                    Inoculate
+                                                                                    a
+                                                                                    starter
+                                                                                    culture
+                                                                                    of
+                                                                                    ml
+                                                                                    of
+                                                                                    LB
+                                                                                    medium
+                                                                                    with
+                                                                                    μL
+                                                                                    of
+                                                                                    spectinomycin
+                                                                                    in
+                                                                                    a
+                                                                                    ml
+                                                                                    tube
+                                                                                    with
+                                                                                    the
+                                                                                    colony
+                                                                                    and
+                                                                                    incubate
+                                                                                    it
+                                                                                    overnight
+                                                                                    at
+^
+                                                                                    with
+                                                                                    shaking.Sequencing
+                                                                                    TMV
+                                                                                    empty
+                                                                                    vector
+                                                                                    with
+                                                                                    the
+                                                                                    primer
+                                                                                    D09OCT01
+                                                                                    (10
+                                                                                    uM).
+μL
+                                                                                    of
+                                                                                    Miniprep
+                                                                                    and
+μL
+                                                                                    of
+                                                                                    primer
+                                                                                    (dilution
+:3).
+                                                                                    Sequencing
+                                                                                    code
+                                                                                    of
+.13.300
+                                                                                    and
+.13.301.</li>
+                                                                                </ul>
+                                                                            </td>
+                                                                        </tr>
+                                                                        <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                                <li>
+                                                                                    Pick
+                                                                                    a
+                                                                                    single
+                                                                                    E.
+                                                                                    coli
+                                                                                    DH5α
+                                                                                    (promoter35s:
+’
+                                                                                    region:
+                                                                                    TFL/Ga20oxPCR:
+                                                                                    Luc:
+                                                                                    Tnos
+                                                                                    -
+                                                                                    promoter35s:
+                                                                                    Renilla:
+                                                                                    Tnos
+                                                                                    )
+                                                                                    colony
+                                                                                    from
+                                                                                    the
+                                                                                    plate
+                                                                                    that
+                                                                                    has
+                                                                                    been
+                                                                                    incubated
+                                                                                    overnight.
+                                                                                    Inoculate
+                                                                                    a
+                                                                                    starter
+                                                                                    culture
+                                                                                    of
+                                                                                    ml
+                                                                                    of
+                                                                                    LB
+                                                                                    medium
+                                                                                    with
+                                                                                    μL
+                                                                                    of
+                                                                                    kanamycin
+                                                                                    in
+                                                                                    a
+                                                                                    ml
+                                                                                    tube
+                                                                                    with
+                                                                                    the
+                                                                                    colony
+                                                                                    and
+                                                                                    incubate
+                                                                                    it
+                                                                                    overnight
+                                                                                    at
+^
+                                                                                    with
+                                                                                    shaking.</li>
+                                                                                </ul>
+                                                                            </td>
+                                                                        </tr>
+                                                                        <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                            <p></p>
+                                                                                <ul>
+                                                                                <li>
+                                                                                    iniprep
+                                                                                    with
+                                                                                    E.Z.N.A
+                                                                                    ®.®
+                                                                                    Plasmid
+                                                                                    Mini
+                                                                                    Kit
+                                                                                    I,
+                                                                                    Q(capless)
+                                                                                    Spin
+                                                                                    of:</li>
+                                                                                </ul>
+                                                                            </td>
+                                                                        </tr>
+                                                                        <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                            <p></p>
+                                                                                <ul>
+                                                                                <li>
+s:
+’
+                                                                                    region:
+                                                                                    TFL
+                                                                                    PCR:
+                                                                                    Luc:
+                                                                                    Tnos
+                                                                                    -
+                                                                                    promoter35s:
+                                                                                    Renilla:
+                                                                                    Tnos</li>
+                                                                                </ul>
+                                                                            </td>
+                                                                        </tr>
+                                                                        <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                                <li>
+                                                                                    </li>
+                                                                                </ul>
+                                                                            </td>
+                                                                            <td>
+s:
+’
+                                                                            region:
+                                                                            Ga20oxPCR:
+                                                                            Luc:
+                                                                            Tnos
+                                                                            -
+                                                                            promoter35s:
+                                                                            Renilla:
+                                                                            Tnos</td>
+                                                                        </tr>
+                                                                        <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                                <li>
+                                                                                    </li>
+                                                                                </ul>
+                                                                            </td>
+                                                                            <td>
+s:
+’
+                                                                            region:
+                                                                            Ga20oxconsensus:
+                                                                            Luc:
+                                                                            Tnos
+                                                                            -
+                                                                            promoter35s:
+                                                                            Renilla:
+                                                                            Tnos</td>
+                                                                        </tr>
+                                                                        <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                                <li>
+                                                                                    </li>
+                                                                                </ul>
+                                                                            </td>
+                                                                            <td>
+s:
+’
+                                                                            region:
+                                                                            Ga20oxKO:
+                                                                            Luc:
+                                                                            Tnos
+                                                                            -
+                                                                            promoter35s:
+                                                                            Renilla:
+                                                                            Tnos</td>
+                                                                        </tr>
+                                                                        <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                            </td>
+                                                                        </tr>
+                                                                        <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                            </td>
+                                                                        </tr>
+                                                                        <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                                <li>
+                                                                                    Digestion
+                                                                                    of
+                                                                                    minipreps
+                                                                                    with
+                                                                                    EcoRV.
+                                                                                    Incubate
+                                                                                    hour
+                                                                                    at
+^</li>
+                                                                                </ul>
+                                                                            </td>
+                                                                        </tr>
+                                                                        <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                                <li>
+                                                                                    Run
+                                                                                    electrophoresis
+                                                                                    gel
+                                                                                    of
+                                                                                    the
+                                                                                    digestion
+                                                                                    products:
+                                                                                    TFLK01,
+                                                                                    TFLK02,
+                                                                                    TFLcons01,
+                                                                                    TFLcons02,
+                                                                                    GAK01,
+                                                                                    GAK02,
+                                                                                    GAcons01,
+                                                                                    GAcons02.</li>
+                                                                                </ul>
+                                                                            </td>
+                                                                        </tr>
+                                                                        <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                                <li>
+                                                                                    Prepare
+                                                                                    the
+                                                                                    Agroinfiltration
+                                                                                    with
+                                                                                    the
+                                                                                    correct
+                                                                                    protocol.</li>
+                                                                                </ul>
+                                                                            </td>
+                                                                        </tr>
+                                                                        <tr>
+                                                                            <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                                <li>
+                                                                                    Centrifuge
+                                                                                    the
+                                                                                    cultures
+                                                                                    at
+                                                                                    rpm
+                                                                                    during
+                                                                                    minutes.
+                                                                                    We
+                                                                                    discard
+                                                                                    the
+                                                                                    supernatant
+                                                                                    and
+                                                                                    it
+                                                                                    is
+                                                                                    necessary
+                                                                                    to
+                                                                                    resuspend
+                                                                                    in
+mL
+                                                                                    of
+                                                                                    Agroinfiltration
+                                                                                    solution.
+                                                                                    Let
+                                                                                    shaking
+                                                                                    it
+                                                                                    a
+                                                                                    RT
+                                                                                    during
+                                                                                    hours.
+                                                                                    OD’s
+                                                                                    measurement</li>
+                                                                                </ul>
+                                                                            </td>
+                                                                        </tr>
+                                                                    </table>
+                                                                </div>
+                                                                <table class=
+                                                                "table table-bordered table-striped">
+                                                                <tr>
+                                                                        <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                            <li>
+                                                                                Reagent</li>
+                                                                            </ul>
+                                                                        </td>
+                                                                        <td>
+                                                                        Volume(μL)</td>
+                                                                    </tr>
+                                                                    <tr>
+                                                                        <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                            <li>
+s:5’region:
+                                                                                TFL/Ga20oxPCR:
+                                                                                Luc:
+                                                                                Tnos</li>
+                                                                            </ul>
+                                                                        </td>
+                                                                        <td>
+</td>
+                                                                    </tr>
+                                                                    <tr>
+                                                                        <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                            <li>
+                                                                                Promoter35s:
+                                                                                Renilla:
+                                                                                Tnos</li>
+                                                                            </ul>
+                                                                        </td>
+                                                                        <td>
+</td>
+                                                                    </tr>
+                                                                    <tr>
+                                                                        <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                            <li>
+                                                                                pUPD2</li>
+                                                                            </ul>
+                                                                        </td>
+                                                                        <td>
+</td>
+                                                                    </tr>
+                                                                    <tr>
+                                                                        <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                            <li>
+                                                                                BSA10X</li>
+                                                                            </ul>
+                                                                        </td>
+                                                                        <td>
+.2</td>
+                                                                    </tr>
+                                                                    <tr>
+                                                                        <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                            <li>
+                                                                                Ligase
+                                                                                Buffer</li>
+                                                                            </ul>
+                                                                        </td>
+                                                                        <td>
+.2</td>
+                                                                    </tr>
+                                                                    <tr>
+                                                                        <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                            <li>
+                                                                                BsmbI</li>
+                                                                            </ul>
+                                                                        </td>
+                                                                        <td>
+</td>
+                                                                    </tr>
+                                                                    <tr>
+                                                                        <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                            <li>
+                                                                                T4
+                                                                                ligase</li>
+                                                                            </ul>
+                                                                        </td>
+                                                                        <td>
+</td>
+                                                                    </tr>
+                                                                    <tr>
+                                                                        <td>
+                                                                            <ul>
+                                                                            <li>
+                                                                                H<sub>2</sub>O
+                                                                                milli-Q</li>
+                                                                            </ul>
+                                                                        </td>
+                                                                        <td>
+.6</td>
+                                                                    </tr>
+                                                                </table>
+                                                            </div>
+                                                            <table class=
+                                                            "table table-bordered table-striped">
+                                                            <tr>
+                                                                    <td>
+                                                                        <ul>
+                                                                            <li>
+                                                                            Ligate
+                                                                            reactions
+                                                                            of
+                                                                            TFL
+                                                                            PCR
+                                                                            and
+                                                                            Ga20ox
+                                                                            PCR
+                                                                            with
+                                                                            Renilla</li>
+                                                                        </ul>
+                                                                    </td>
+                                                                </tr>
+                                                            </table>
+                                                        </div>
+                                                        <table class=
+                                                        "table table-bordered table-striped">
+                                                        <tr>
+                                                                <td>
+                                                                    <ul>
+                                                                        <li>
+</li>
+                                                                    </ul>
+                                                                </td>
+                                                                <td>35S:5’</td>
+                                                                <td>pUPD2</td>
+                                                                <td>CAM</td>
+                                                            </tr>
+                                                            <tr>
+                                                                <td>
+                                                                    <ul>
+                                                                        <li>
+</li>
+                                                                    </ul>
+                                                                </td>
+                                                                <td>
+                                                                SAGTI:Luc</td>
+                                                                <td>pUPD2</td>
+                                                                <td>CAM</td>
+                                                            </tr>
+                                                            <tr>
+                                                                <td>
+                                                                    <ul>
+                                                                        <li>
+</li>
+                                                                    </ul>
+                                                                </td>
+                                                                <td>
+s:5’:TFLPCR:Luc:Tnos</td>
+                                                                <td>3α1</td>
+                                                                <td>KAN</td>
+                                                            </tr>
+                                                            <tr>
+                                                                <td>
+                                                                    <ul>
+                                                                        <li>
+</li>
+                                                                    </ul>
+                                                                </td>
+                                                                <td>
+s:5’:Ga20PCR:Luc:Tnos</td>
+                                                                <td>3α1</td>
+                                                                <td>KAN</td>
+                                                            </tr>
+                                                        </table>
+                                                    </div>
+                                                    <table class=
+                                                    "table table-bordered table-striped">
+                                                    <tr>
+                                                            <td>
+                                                                <p></p>
+                                                                <ul>
+                                                                    <li>H5α
+                                                                    <i>E.
+                                                                    coli</i>
+                                                                    transformation
+                                                                    with the
+                                                                    devices:</li>
+                                                                </ul>
+                                                            </td>
+                                                        </tr>
+                                                        <tr>
+                                                            <td>
+                                                                <p></p>
+                                                                <ul>
+                                                                    <li>5S : 5’
+                                                                    region :
+                                                                    TFL KO :
+                                                                    Luc : Tnos
+                                                                    -
+                                                                    promoter35s:
+                                                                    Renilla:Tnos
+                                                                    in Ω2</li>
+                                                                </ul>
+                                                            </td>
+                                                        </tr>
+                                                        <tr>
+                                                            <td>
+                                                                <ul>
+                                                                    <li></li>
+                                                                </ul>
+                                                            </td>
+                                                            <td>35S : 5’ region
+                                                            : TFL consensus :
+                                                            Luc : Tnos -
+                                                            promoter35s:
+                                                            Renilla:Tnos in
+                                                            Ω2</td>
+                                                        </tr>
+                                                        <tr>
+                                                            <td>
+                                                                <ul>
+                                                                    <li></li>
+                                                                </ul>
+                                                            </td>
+                                                            <td>35S : 5’ region
+                                                            : Ga20ox KO : Luc :
+                                                            Tnos - promoter35s:
+                                                            Renilla:Tnos in
+                                                            Ω2</td>
+                                                        </tr>
+                                                        <tr>
+                                                            <td>
+                                                                <ul>
+                                                                    <li></li>
+                                                                </ul>
+                                                            </td>
+                                                            <td>35S : 5’ region
+                                                            : Ga20ox consensus
+                                                            : Luc : Tnos -
+                                                            promoter35s:
+                                                            Renilla:Tnos in
+                                                            Ω2</td>
+                                                        </tr>
+                                                        <tr>
+                                                            <td></td>
+                                                        </tr>
+                                                        <tr>
+                                                            <td></td>
+                                                        </tr>
+                                                        <tr>
+                                                            <td>
+                                                                <ul>
+                                                                    <li>E. coli
+                                                                    plating in
+                                                                    plates with
+                                                                    Kanamycin
+                                                                    (antibiotic).
+                                                                    Incubate 16
+                                                                    hours at
+^</li>
+                                                                </ul>
+                                                            </td>
+                                                        </tr>
+                                                        <tr>
+                                                            <td>
+                                                                <p></p>
+                                                                <ul>
+                                                                    <li>
+                                                                    inipreps
+                                                                    with
+                                                                    E.Z.N.A ®.®
+                                                                    Plasmid
+                                                                    Mini Kit I,
+                                                                    Q(capless)
+                                                                    Spin
+                                                                    of:</li>
+                                                                </ul>
+                                                            </td>
+                                                        </tr>
+                                                        <tr>
+                                                            <td>
+                                                                <p></p>
+                                                                <ul>
+                                                                    <li>
+s:5’region:TFL
+                                                                    PCR:Luc:Tnos
+                                                                    in α1</li>
+                                                                </ul>
+                                                            </td>
+                                                        </tr>
+                                                        <tr>
+                                                            <td>
+                                                                <ul>
+                                                                    <li></li>
+                                                                </ul>
+                                                            </td>
+                                                            <td>
+s:5’region:Ga20oxPCR:
+                                                            Luc: Tnos in
+                                                            α1</td>
+                                                        </tr>
+                                                        <tr>
+                                                            <td></td>
+                                                        </tr>
+                                                        <tr>
+                                                            <td></td>
+                                                        </tr>
+                                                        <tr>
+                                                            <td>
+                                                                <ul>
+                                                                    <li>Pick a
+                                                                    single E.
+                                                                    coli DH5α
+                                                                    (TMV CDS)
+                                                                    colony from
+                                                                    the plate
+                                                                    that has
+                                                                    been
+                                                                    incubated
+                                                                    overnight.
+                                                                    Inoculate a
+                                                                    starter
+                                                                    culture of
+ml of LB
+                                                                    medium with
+μL of
+                                                                    kanamycin
+                                                                    in a 50 ml
+                                                                    tube with
+                                                                    the colony
+                                                                    and
+                                                                    incubate it
+                                                                    overnight
+                                                                    at 37^ with
+                                                                    shaking.</li>
+                                                                </ul>
+                                                            </td>
+                                                        </tr>
+                                                        <tr>
+                                                            <td>
+                                                                <ul>
+                                                                    <li>
+                                                                    Digestion
+                                                                    of
+                                                                    minipreps
+                                                                    with EcoRI.
+                                                                    Incubate 1
+                                                                    hour at
+^</li>
+                                                                </ul>
+                                                            </td>
+                                                        </tr>
+                                                        <tr>
+                                                            <td>
+                                                                <ul>
+                                                                    <li>Run
+                                                                    electrophoresis
+                                                                    gel of the
+                                                                    devices. We
+                                                                    remain the
+                                                                    samples
+.</li>
+                                                                </ul>
+                                                            </td>
+                                                        </tr>
+                                                        <tr>
+                                                            <td>
+                                                                <ul>
+                                                                    <li>Store
+                                                                    at -80^ the
+                                                                    devices of
+                                                                    gTS
+                                                                    PCR</li>
+                                                                </ul>
+                                                            </td>
+                                                        </tr>
+                                                    </table>
+                                                </div>
+                                                <table class=
+                                                "table table-bordered table-striped">
+                                                <tr>
+                                                        <td>
+                                                            <ul>
+                                                                <li>
+                                                                Reagent</li>
+                                                            </ul>
+                                                        </td>
+                                                        <td>Volume(μL)</td>
+                                                    </tr>
+                                                    <tr>
+                                                        <td>
+                                                            <ul>
+                                                                <li>TFL
+                                                                KO/Ga20KO/TFL
+                                                                cons /
+                                                                Ga20oxcons</li>
+                                                            </ul>
+                                                        </td>
+                                                        <td>1</td>
+                                                    </tr>
+                                                    <tr>
+                                                        <td>
+                                                            <ul>
+                                                                <li>
+                                                                Promoter35s:
+                                                                Renilla:
+                                                                Tnos</li>
+                                                            </ul>
+                                                        </td>
+                                                        <td>1</td>
+                                                    </tr>
+                                                    <tr>
+                                                        <td>
+                                                            <ul>
+                                                                <li>pUPD2</li>
+                                                            </ul>
+                                                        </td>
+                                                        <td>1</td>
+                                                    </tr>
+                                                    <tr>
+                                                        <td>
+                                                            <ul>
+                                                                <li>BSA10X</li>
+                                                            </ul>
+                                                        </td>
+                                                        <td>1.2</td>
+                                                    </tr>
+                                                    <tr>
+                                                        <td>
+                                                            <ul>
+                                                                <li>Ligase
+                                                                Buffer</li>
+                                                            </ul>
+                                                        </td>
+                                                        <td>1.2</td>
+                                                    </tr>
+                                                    <tr>
+                                                        <td>
+                                                            <ul>
+                                                                <li>BsmbI</li>
+                                                            </ul>
+                                                        </td>
+                                                        <td>1</td>
+                                                    </tr>
+                                                    <tr>
+                                                        <td>
+                                                            <ul>
+                                                                <li>T4
+                                                                ligase</li>
+                                                            </ul>
+                                                        </td>
+                                                        <td>1</td>
+                                                    </tr>
+                                                    <tr>
+                                                        <td>
+                                                            <ul>
+                                                                <li>
+                                                                H<sub>2</sub>O
+                                                                milli-Q</li>
+                                                            </ul>
+                                                        </td>
+                                                        <td>4.6</td>
+                                                    </tr>
+                                                </table>
+                                            </div>
+                                            <table class=
+                                            "table table-bordered table-striped">
+                                            <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <p></p>
+                                                        <ul>
+                                                            <li>iniprep with
+                                                            E.Z.N.A ®.® Plasmid
+                                                            Mini Kit I,
+                                                            Q(capless) Spin
+                                                            of:</li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <p></p>
+                                                        <ul>
+                                                            <li>5s: TFL PCR :
+                                                            Luc : Tnos</li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                    <td></td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <ul>
+                                                            <li></li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                    <td>35s : Ga20ox PCR : Luc
+                                                    : Tnos</td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td></td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td></td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <ul>
+                                                            <li>Digestion of
+                                                            minipreps with
+                                                            EcoRI following
+                                                            digestion protocol.
+                                                            Incubate 1 hour at
+^.</li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <ul>
+                                                            <li>Run
+                                                            electrophoresis gel
+                                                            of the digestion
+                                                            products. We will
+                                                            discard this
+                                                            culture because the
+                                                            gel result doesn’t
+                                                            correspond with
+                                                            what we
+                                                            expect.</li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <ul>
+                                                            <li>
+                                                            Agroinfiltration
+                                                            procedure with 9
+                                                            plants of
+                                                            N.benthamiana
+                                                            following the
+                                                            Agroinfiltration
+                                                            protocol.</li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <ul>
+                                                            <li></li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <ul>
+                                                            <li>Pick up the
+                                                            samples of
+                                                            infiltrated plants.
+                                                            We keep 3 disks per
+                                                            plant in a
+                                                            Eppendorf tube and
+                                                            we take 2 samples
+                                                            of each plant.</li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <ul>
+                                                            <li>Luciferase
+                                                            assay is made
+                                                            following the
+                                                            correct protocol.
+                                                            After analyzing all
+                                                            the data obtained,
+                                                            it seems that the
+                                                            system works but we
+                                                            must optimized it
+                                                            to increase the
+                                                            signal range. In
+                                                            this way, we will
+                                                            be able to
+                                                            distinguish signal
+                                                            from noise.</li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <p></p>
+                                                        <ul>
+                                                            <li>onclusions
+                                                            luciferase
+                                                            assay:</li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <p></p>
+                                                        <ul>
+                                                            <li>liminate 5’
+                                                            region of the
+                                                            device</li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <ul>
+                                                            <li></li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                    <td>Change linker
+                                                    sequence</td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <ul>
+                                                            <li></li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                    <td>Add renilla in
+                                                    luciferase assay</td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <ul>
+                                                            <li></li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                    <td>Change reporter to
+                                                    +1</td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <ul>
+                                                            <li></li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                    <td>Use pLess as
+                                                    control</td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <ul>
+                                                            <li></li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                    <td>Use a Wild Type as
+                                                    control</td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <ul>
+                                                            <li></li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                    <td>Insert devices in
+                                                    cis</td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <ul>
+                                                            <li></li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                    <td>Design a consensus
+                                                    target as longer as the
+                                                    amplified.</td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td></td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td></td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <ul>
+                                                            <li>Culture refresh
+                                                            of C58
+                                                            <i>Agrobacterium</i>
+                                                            to infiltrate on
+                                                            Friday.</li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <ul>
+                                                            <li>Pick a single
+                                                            E. coli DH5α
+                                                            (35s:5’region:TFL
+                                                            PCR:Luc:Tnos in α1
+                                                            and
+s:5’region:Ga20oxPCR:
+                                                            Luc: Tnos in α1)
+                                                            colony from the
+                                                            plate that has been
+                                                            incubated
+                                                            overnight.
+                                                            Inoculate a starter
+                                                            culture of 4 ml of
+                                                            LB medium with 4 μL
+                                                            of kanamycin in a
+ml tube with the
+                                                            colony and incubate
+                                                            it overnight at 37^
+                                                            with shaking.</li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                </tr>
+                                                <tr>
+                                                    <td>
+                                                        <ul>
+                                                            <li>Targets
+                                                            ligations with
+                                                            Renilla
+                                                            reporters.</li>
+                                                        </ul>
+                                                    </td>
+                                                </tr>
+                                            </table>
+                                        </div>
+                                        <table class=
+                                        "table table-bordered table-striped">
+                                            <tr>
+                                                <td>
+                                                    <ul>
+                                                        <li>Device</li>
+                                                    </ul>
+                                                </td>
+                                                <td>Order</td>
+                                                <td>Sequencing</td>
+                                            </tr>
+                                            <tr>
+                                                <td>
+                                                    <ul>
+                                                        <li>TFL PCR</li>
+                                                    </ul>
+                                                </td>
+                                                <td>210.13.250</td>
+                                                <td>SNP in the position 652 of
+                                                the target. Position 1 of the
+                                                gRNA. GA</td>
+                                            </tr>
+                                            <tr>
+                                                <td>
+                                                    <ul>
+                                                        <li>Ga20ox PCR</li>
+                                                    </ul>
+                                                </td>
+                                                <td>210.13.253</td>
+                                                <td>Same sequence</td>
+                                            </tr>
+                                            <tr>
+                                                <td>
+                                                    <ul>
+                                                        <li>TFL consensus</li>
+                                                    </ul>
+                                                </td>
+                                                <td>210.13.251</td>
+                                                <td>Same sequence</td>
+                                            </tr>
+                                            <tr>
+                                                <td>
+                                                    <ul>
+                                                        <li>TFL KO</li>
+                                                    </ul>
+                                                </td>
+                                                <td>210.13.252</td>
+                                                <td>Same sequence</td>
+                                            </tr>
+                                            <tr>
+                                                <td>
+                                                    <ul>
+                                                        <li>Ga20ox
+                                                        Consensus</li>
+                                                    </ul>
+                                                </td>
+                                                <td>210.13.254</td>
+                                                <td>Same sequence</td>
+                                            </tr>
+                                            <tr>
+                                                <td>
+                                                    <ul>
+                                                        <li>Ga20ox KO</li>
+                                                    </ul>
+                                                </td>
+                                                <td>210.13.255</td>
+                                                <td>Same sequence</td>
+                                            </tr>
+                                        </table>
+                                    </div>
+                                    <table class=
+                                    "table table-bordered table-striped">
+                                        <tr>
+                                            <td>
+                                                <ul>
+                                                    <li>Received the necessary
+                                                    primers to sequence: TFL
+                                                    consensus, TFL knockout,
+                                                    Ga20ox consensus and Ga20ox
+                                                    knockout.</li>
+                                                </ul>
+                                            </td>
+                                        </tr>
+                                        <tr>
+                                            <td>
+                                                <p></p>
+                                                <ul>
+                                                    <li>repare
+                                                    <i>Agrobacterium</i>
+                                                    cultures: Inoculate a
+                                                    starter culture of 5 ml of
+                                                    LB medium with 5 μL of
+                                                    Kanamycin and 5 μL of
+                                                    rifampin in a 50 ml tube
+                                                    with the colony and
+                                                    incubate it 48 hours at 28^
+                                                    with shaking. The devices
+                                                    are:</li>
+                                                </ul>
+                                            </td>
+                                        </tr>
+                                        <tr>
+                                            <td>
+                                                <p></p>
+                                                <ul>
+                                                    <li>5S : 5’Region : TFL
+                                                    consensus : Luc : Tnos</li>
+                                                </ul>
+                                            </td>
+                                        </tr>
+                                        <tr>
+                                            <td>
+                                                <ul>
+                                                    <li></li>
+                                                </ul>
+                                            </td>
+                                            <td>35S : 5’Region : TFL knockout :
+                                            Luc : Tnos</td>
+                                        </tr>
+                                        <tr>
+                                            <td>
+                                                <ul>
+                                                    <li></li>
+                                                </ul>
+                                            </td>
+                                            <td>35S : 5’Region :TFL PCR: Luc :
+                                            Tnos</td>
+                                        </tr>
+                                        <tr>
+                                            <td>
+                                                <ul>
+                                                    <li></li>
+                                                </ul>
+                                            </td>
+                                            <td>35S : 5’Region : Ga20ox
+                                            consensus : Luc : Tnos</td>
+                                        </tr>
+                                        <tr>
+                                            <td>
+                                                <ul>
+                                                    <li></li>
+                                                </ul>
+                                            </td>
+                                            <td>35S : 5’Region : Ga20ox
+                                            knockout : Luc : Tnos</td>
+                                        </tr>
+                                        <tr>
+                                            <td>
+                                                <ul>
+                                                    <li></li>
+                                                </ul>
+                                            </td>
+                                            <td>35S : 5’Region :Ga20ox PCR: Luc
+                                            : Tnos</td>
+                                        </tr>
+                                        <tr>
+                                            <td></td>
+                                        </tr>
+                                        <tr>
+                                            <td></td>
+                                        </tr>
+                                        <tr>
+                                            <td>
+                                                <ul>
+                                                    <li>Sequencing the last
+                                                    devices to check if these
+                                                    are correct.</li>
+                                                </ul>
+                                            </td>
+                                        </tr>
+                                        <tr>
+                                            <td>
+                                                <ul>
+                                                    <li></li>
+                                                </ul>
+                                            </td>
+                                        </tr>
+                                        <tr>
+                                            <td>
+                                                <ul>
+                                                    <li>Refresh
+                                                    <i><i>Agrobacterium</i>
+                                                    tumefaciens</i> cultures
+                                                    with the aim of
+                                                    infiltrating in
+                                                    N.benthamiana on 29/07</li>
+                                                </ul>
+                                            </td>
+                                        </tr>
+                                        <tr>
+                                            <td>
+                                                <ul>
+                                                    <li>Refresh cultures of the
+                                                    devices 35s: 5’ region: TFL
+                                                    PCR : Luc : Tnos and 35s :
+’ region: Ga20ox PCR : Luc
+                                                    : Tnos in order to prepare
+                                                    the more Miniprep
+                                                    reaction.</li>
+                                                </ul>
+                                            </td>
+                                        </tr>
+                                        <tr>
+                                            <td>
+                                                <ul>
+                                                    <li>Sequencing results have
+                                                    arrived.</li>
+                                                </ul>
+                                            </td>
+                                        </tr>
+                                    </table>
+                                </div>
+                                <table class=
+                                "table table-bordered table-striped">
+                                    <tr>
+                                        <th>
+                                            <ul>
+                                                <li>Lanes</li>
+                                            </ul>
+                                        </th>
+                                        <th>Samples</th>
+                                        <th>Verification</th>
+                                    </tr>
+                                    <tr>
+                                        <td>
+                                            <ul>
+                                                <li>1</li>
+                                            </ul>
+                                        </td>
+                                        <td>1 Kb molecular weight marker</td>
+                                        <td></td>
+                                    </tr>
+                                    <tr>
+                                        <td>
+                                            <ul>
+                                                <li>2</li>
+                                            </ul>
+                                        </td>
+                                        <td>TFL PCR</td>
+                                        <td></td>
+                                    </tr>
+                                    <tr>
+                                        <td>
+                                            <ul>
+                                                <li>3</li>
+                                            </ul>
+                                        </td>
+                                        <td>Ga20ox PCR</td>
+                                        <td></td>
+                                    </tr>
+                                </table>
+                            </div>
+                        </li>
+                    </ul>
+                </div>
+            </div>
+        </div>
+    </section>
 </body>
 </html>
 {{:Team:Valencia_UPV/Templates:footerUPV}}